पर सतहों मानव Norovirus की जांच के लिए स्वाब नमूने विधि

Published: February 6th, 2017

DOI:

10.3791/55205

Geun Woo Park¹, Preeti Chhabra¹, Jan Vinjé¹

¹Division of Viral Diseases, Centers for Disease Control and Prevention

A macrofoam based sampling methodology was developed and evaluated for the detection and quantification of norovirus on environmental hard surfaces.

मानव noroviruses महामारी और दुनिया भर में छिटपुट आंत्रशोथ का एक प्रमुख कारण हैं। क्योंकि सबसे अधिक संक्रमण या तो सीधे व्यक्ति से व्यक्ति के मार्ग के माध्यम से या परोक्ष रूप से पर्यावरण सतहों या भोजन के माध्यम से फैल रहे हैं, दूषित fomites और निर्जीव सतहों नोरोवायरस प्रकोप के दौरान वायरस के प्रसार के लिए महत्वपूर्ण वाहनों रहे हैं।

हम विकसित किया है और एक प्रोटोकॉल का पता लगाने और कठोर सतहों से मानव noroviruses की टाइपिंग के लिए macrofoam swabs का उपयोग कर मूल्यांकन। फाइबर इत्तला दे दी swabs या antistatic पोंछे के साथ तुलना में, macrofoam के फाहे से अप करने के लिए 700 सेमी ² के शौचालय की सीट सतहों वायरस वसूली (रेंज 1.2-33.6%) अनुमति देते हैं। प्रोटोकॉल के फाहे से वायरस की निकासी और वायरल शाही सेना स्पिन स्तंभों का उपयोग कर के आगे एकाग्रता के लिए कदम भी शामिल है। कुल में, 127 217 झाड़ू नमूने है कि क्रूज जहाजों और लंबे समय तक देखभाल सुविधाओं में सतहों जहां नोरोवायरस आंत्रशोथ किया गया था से एकत्र किया गया था (58.5%)RT-qPCR द्वारा जी आई आई नोरोवायरस के लिए सकारात्मक परीक्षण की सूचना दी। इन 29 (22.8%) का सफलतापूर्वक genotyped किया जा सकता है। अंत में, हम प्रोटोकॉल वायरस का पता लगाने के साथ ही प्रकोप के दौरान पर्यावरण प्रदूषण के स्तर को निर्धारित करने में सहायता कर सकते हैं जब नैदानिक नमूने उपलब्ध नहीं हैं विकसित का उपयोग कर पर्यावरण सतहों पर नोरोवायरस का पता लगाने; यह भी remediation रणनीति के प्रभाव की निगरानी की सुविधा हो सकती है।

मानव noroviruses महामारी और छिटपुट तीव्र आंत्रशोथ दुनिया भर में ^{^1,} ^{^2,} ³ के एक प्रमुख कारण हैं। वायरस बहुत संक्रामक है और ट्रांसमिशन व्यक्ति बातचीत करने के लिए या परोक्ष रूप से दूषित भोजन, पानी या पर्यावरण सतहों के साथ संपर्क के माध्यम से प्रत्यक्ष व्यक्ति के माध्यम से होता है। Noroviruses विस्तारित अवधि के लिए बहाया जा सकता है और लंबे समय तक पर्यावरण सतहों पर वायरस के जीवित रहने की ^{^1,} ^{^2,} ³ प्रलेखित किया गया है। शिखर बहा दौरान वायरस कणों के अरबों मल के ग्राम प्रति जारी कर रहे ह....

1. क्षेत्र में स्वाब नमूने

दस्ताने की एक साफ जोड़ी पहनें।
एक मापने टेप या शासक का उपयोग कर सतह को छूने के बिना नमूना क्षेत्र के आकार को मापने। सही रूप में संभव के रूप में क्षेत्र का अनुमान है और एक .......

चित्रा 1 झाड़ू नमूने प्रोटोकॉल का एक फ़्लोचार्ट प्रस्तुत करता है। इस प्रोटोकॉल चार मुख्य चरण के होते हैं; 1) नमूना संग्रह, 2) नमूना भंडारण और परिवहन, 3) वायरल शाही सेना शुद्धि और एकाग्रता.......

Noroviruses 18 और 10 ³ वायरस कणों ^{20 के} बीच एक 50% मानव संक्रामक खुराक है। इसलिए, भले सतहों के निम्न स्तर के प्रदूषण को एक सार्वजनिक स्वास्थ्य जोखिम पैदा कर सकता है। 1) विभिन्न झाड़ू सामग्री, 2) परिवहन के दौर.......

The authors have no acknowledgements.

....

Name	Company	Catalog Number	Comments
Generic name for kits
Macrofoam swab	Premoistened EnviroMax Swab kit	Puritan	2588060PFUW
RNA Lysis buffer	CDC UNEX buffer	Microbiologics	Cat No MR0501
RNA extraction spin column	Midi column	Omega Biotek	Cat No R6664-02
RNA purification spin column	Zymol RNA Clean and Concentrator kit	Zymo Research	Cat No R1016
Real time RT-PCR kit	AgPath kit One-Step RT-PCR Kit	Life Technologies	Cat No 4387391
Conventional RT-PCR kit	Qiagen one step RT-PCR kit	Qiagen kit	Cat No 210212
Gel extraction kit	Qiagen QIAquick gel extraction kit	Qiagen kit	Cat No 28704 or 28706
	Coliphage MS2	ATCC	Cat No 15597-B1
	RNA run-off transcripts			Bacteriophage MS2 (ATCC No. 15597-B1) can be cultivated using Escherichia coli (E.coli) F_amp (ATCC No. 700891).
	Realtime PCR platform	Applied Biosystems	Model ABI 7500	GI and GII RNA run off transcripts were quantified spectrophotometrically at A260, diluted in diethyl pyrocarbonate-treated water to 1 × 10⁶ copies/ μl, and stored at −80°C with 1.0 U /μl RNasin (Promega, Madison, WI).
	Optical 96-well reaction plate	Thermo Scientific	Cat No 4316813
	MicroAmp Clear Adhesive Film	Thermo Scientific	Cat No 4306311

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