Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Developmental Biology
تشريح وإعداد شريحة الاكليلية وضع الغدة النخامية الماوس
نقدم بروتوكولا لتشريح الغدد النخامية وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية من الفئران البلدان النامية.
الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن. يتكون من الغدد اثنين مع أصول الجنينية منفصلة والوظائف – في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس. الغدة النخامية الماوس نامية صغيرة وحساسة بشكل بيضاوي ممدود. مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس.
والهدف من هذا البروتوكول تحقيق الأقسام الاكليلية الغدة النخامية سليمة مع أبنية الأنسجة المحفوظة جيدا من البلدان النامية الفئران. ونحن في هذا البروتوكول، تصف بالتفصيل كيفية تشريح ومعالجة الغدد النخامية بشكل صحيح من البلدان النامية الفئران. أولاً، يحدد نضح ترانسكارديال الفورمالدهايد قبل تشريح الفئران. ثم يتم تطبيق ثلاث تقنيات تشريح مختلفة للحصول على الغدد النخامية سليمة تبعاً لعمر الفئران. للفئران الجنينية سن 17.5 يوما الجنينية (ه)-18.5 وحديثي الولادة تصل إلى 4 أيام، هي تشريح لمنطقتي سيلا كامل بما في ذلك عظم وتدي والغدة تريجيمينال الأعصاب. الجراء هي تشريح عمره يوما بعد الولادة (ع) 5-14، الغدد النخامية متصلة مع الأعصاب تريجيمينال ككل. للفئران القديمة أكثر من 3 أسابيع، يتم تشريح الغدد النخامية بعناية مجانية من الأنسجة المحيطة بها. ونحن أيضا عرض كيفية تضمين الغدد النخامية في اتجاه سليم باستخدام الأنسجة المحيطة بها كمعالم للحصول على إشباع المقاطع الاكليلية. هذه الأساليب مفيدة في تحليل الملامح النسيجي واﻹنمائية الغدد النخامية في وضع الفئران.
الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن1،2. تشريحيا، الغدة النخامية بنية '' اثنين في واحد '' تتكون من نيوروهيبوفيسيس وأدينوهيبوفيسيس. هذه الأجزاء لها أصول جنينية مختلفة والدالة بطريقة مختلفة جداً. مشتق من الأديم الظاهر العصبي neurohypophysis وتفرز الاكسيتوسين والهرمون المضاد. Adenohypophysis تنبع من الحقيبة راثكي وهي المسؤولة عن الإفراج عن الهرمونات بما فيها هرمون النمو، البرولاكتين، – الغدة الدرقية الهرمون، جريب – الهرمون، والهرمون، وهرمون ﻫﺭﻣﻭﻧ، و الصباغية – الهرمون3،،من45.<....
هي ولدت الفئران C57BL/6 في ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض. جميع الأساليب التجريبية الحيوانية امتثالا للمبادئ التوجيهية التي أقرتها لجنة الأخلاقيات في الجامعة الطبية العسكرية الثانية ورعاية الحيوان.
1-"تسلخ من بعد الولادة تطوير الغدة النخامية"
- إجراء التخدير: مكان ال?.......
ويقدم هذا البروتوكول وسيلة تشريح الغدد النخامية من الفئران البلدان النامية. للماوس الولدان، ومنطقتي سيلا كاملة تحتوي على الغدة النخامية والأعصاب تريجيمينال، وتحت تم تشريح عظم وتدي خارجاً من قاعدة الجمجمة. الغدة النخامية صغيرة وحساسة لا تزال سليمة أثناء العملية (
لوضع بيتويتاريس مورين، كان من الصعب من الناحية الفنية للحصول على أقسام الاكليلية السليمة نظراً لخصائصها صغيرة وهشة والخصائص التشريحية الفريدة6،8. ومن ثم اختيار بعض المجموعات البحثية أبواب منتصف السهمي لتحليل مورفولوجية الجنينية والوليدية الغدة النخامية<.......
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tools/Equipment | |||
| Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
| Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
| Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
| Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
| 26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
| Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
| Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
| 35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
| Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
| Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
| Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
| Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
| Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
| Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
| Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
| Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Urethane | BBI | EB0448 | |
| NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
| KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
| Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
| K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
| NaNO2 | Sigma | 237213 | |
| Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Xylene | SCR | 10023418 | |
| Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
| Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
| Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
| rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
| antibody | Pituitary Program | ||
| Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
| Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
| TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
| Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
| Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
- Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
- Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
- Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
- Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
- Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
- Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
- Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
- Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
- Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
- Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
- Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
- Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
- Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
- Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved