Dissektion og koronale skive forberedelse for at udvikle mus hypofysen

Vi præsenterer en protokol til at dissekere hypofyse og forberede hypofyse koronale sektioner fra udvikle mus.

Hypofysen eller hypofysen er en vigtig endokrine organ udskiller hormoner afgørende for homeostase. Det består af to kirtler med separat embryonale oprindelse og funktioner — neurohypophysis og adenohypophysis. Udvikle mus hypofyse kirtel er lille og delikat med en aflang oval form. En koronale del er foretrukket at vise både adenohypophysis og neurohypophysis i en enkelt skive af musen hypofysen.

Målet med denne protokol er at opnå ordentlig hypofyse koronale sektioner med velbevarede væv arkitekturer fra udvikle mus. I denne protokol beskriver vi i detaljer hvordan man kan dissekere og behandle hypofyse korrekt fra udvikle mus. Først, mus er fastsat af transcardial perfusion af formaldehyd før dissektion. Derefter anvendes tre forskellige dissekere teknikker for at opnå intakt hypofyse afhængigt af alder af mus. For føtal mus alderen embryonale dage (E) 17,5-18,5 og nyfødte op til 4 dage, er hele sella regioner herunder kilebenet, kirtel og trigeminus nerver dissekeret. For hvalpe er alderen postnatal dage (P) 5-14, hypofyse forbundet med trigeminus nerver dissekeret som helhed. For mus over 3 uger gamle, er hypofyse omhyggeligt dissekeret gratis fra det omgivende væv. Vi viser også hvordan man kan integrere hypofyse i en ordentlig orientering ved hjælp af det omgivende væv som vartegn for at opnå tilfredsstillende koronale sektioner. Disse metoder er nyttige i at analysere histologiske og udviklingsmæssige funktioner af hypofyse udvikle mus.

Hypofysen eller hypofysen er en vigtig endokrine organ udskiller hormoner afgørende for homeostase^1,2. Anatomisk, er hypofysen en '' to-i-én '' struktur bestående af neurohypophysis og adenohypophysis. Disse dele har forskellig embryonale oprindelse og funktion meget forskelligt. Neurohypophysis er afledt af neurale ectoderm og udskiller oxytocin og antidiuretisk hormon. Adenohypophysis stammer fra Rathkes pose og er ansvarlig for frigivelse af hormoner, herunder væksthormon, prolaktin, thyreoidea - stimulerende hormon, follikel - stimulerende hormon, luteiniserende hormon, adrenokortikotropt hormon, og melano....

C57BL/6 mus er avlet i specifikt patogenfrie betingelser. Alle dyr eksperimentelle metoder er i overensstemmelse med de retningslinjer, der er godkendt af Animal Care og etiske komité på anden militær medicinske universitet.

1. dissektion af Postnatal udvikling hypofysen

1. udføre anæstesi: placere neonatal mus (P0 - P5) på knust is til at fremkalde hypotermi. For mus ældre end 5 dage gammel, indsprøjtes 5% urethan (30 µL/g kropsvægt) intraperitoneal for at fremkalde anæste.......

Denne protokol udgør en metode til at dissekere hypofyse fra udvikle mus. For neonatal musen, hele sella regioner med hypofysen, trigeminus nerver og nedenunder sphenoid knoglen var dissekeret ud fra kraniet base. De små og sarte hypofysen forblev intakt i løbet af processen (figur 1A). For mus ældre end 5 dage, hypofyse knyttet til de laterale trigeminus nerver var så isolerede. Grov struktur af hypofysen isoleret fra P7 mus var velbevarede (

For at udvikle murine pituitaries, har det været teknisk vanskeligt at opnå ordentlig koronale sektioner på grund af deres lille og skrøbelig funktioner og unikke anatomiske karakteristika^6,8. Nogle forskningsgrupper således valgte midten af sagittal sektioner til at analysere morfologi af embryonale og neonatal hypofyse^11,12. Midten af sagittal sektion af hypofysen er også i stand til at vise anter.......

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (31201086, 31470759 og 31671219) og Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900).