Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Developmental Biology
Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll zur Hypophyse zu sezieren und bereiten Hypophyse koronalen Abschnitte von Mäusen zu entwickeln.
Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase. Es besteht aus zwei Drüsen mit getrennten embryonale Herkunft und Funktionen – die Neurohypophysis und die Adenohypophysis. Die entwickelnden Maus pituitäre Drüse ist klein und zart mit eine längliche ovale Form. Ein koronaler Abschnitt wird bevorzugt, um die Adenohypophysis und Neurohypophysis in eine einzige Scheibe der Hypophyse Maus angezeigt.
Das Ziel dieses Protokolls ist es, richtige Hypophyse koronalen Abschnitte mit gut erhaltenen Gewebe Architekturen aus Entwicklungsländern Mäuse zu erreichen. In diesem Protokoll beschrieben detailliert wie man sezieren und Prozess Hypophyse richtig von Mäusen zu entwickeln. Erstens werden Mäuse durch Transcardial Perfusion von Formaldehyd vor der Präparation fixiert. Dann sind drei verschiedene sezierenden Techniken angewendet, um intakte Hypophyse je nach Alter von Mäusen zu erhalten. Für Fetale Mäuse bis 4 Tage embryonalen Tag(e) 17,5-18,5 und Neugeborene bis Jahren, werden die gesamte Sella Regionen einschließlich Sphenoid Knochen, Drüse und Trigeminal Nerven indiziert. Für Welpen sind Alter postnatale Tagen (P) 5-14, der Hypophyse verbunden mit Trigeminal Nerven als Ganzes seziert. Bei Mäusen über 3 Wochen alt sind die Hypophyse sorgfältig frei aus dem umliegenden Gewebe seziert. Gewusst wie: der Hypophyse einbetten in eine korrekte Ausrichtung mithilfe der umgebenden Gewebe als Landmarken zu befriedigen koronalen Abschnitte anzeigen Diese Methoden sind hilfreich bei der Analyse von histologischer und Entwicklungsstörungen Funktionen der Hypophyse bei der Entwicklung von Mäusen.
Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase1,2. Anatomisch ist die Hypophyse eine '' Two-in-One'' Struktur bestehend aus der Neurohypophysis und der Adenohypophysis. Diese Teile haben unterschiedliche embryonale Herkunft und Funktion sehr unterschiedlich. Die Neurohypophysis ergibt sich aus der neuralen Ektoderm und sondert Oxytocin und Antidiuretic Hormon. Die Adenohypophysis stammt aus Rathkes-Tasche und ist verantwortlich für die Freisetzung von Hormonen wie Wachstumshormon, Prolaktin, Schilddrüsenhormone – Förderung, Follikel –....
C57BL/6 Mäusen werden in bestimmten Pathogen-freies Bedingungen gezüchtet. Alle tierische experimentellen Methoden sind nach den Richtlinien von Animal Care und Ethikkommission medizinischen Universität zweiten Militär genehmigt.
1. Dissektion der postnatalen Entwicklung Hypophyse
Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Hypophyse aus Entwicklungsländern Mäuse zu sezieren. Für die Neugeborenen Maus, die gesamte Sella-Regionen mit der Hypophyse, die Trigeminal Nerven und der Unterseite Sphenoid Knochen wurden heraus von der Schädelbasis seziert. Die kleinen und zarten Hypophyse intakt geblieben während des Prozesses (Abbildung 1A). Bei Mäusen, die älter als 5 Tage, der Hypophyse, befestigt an den seitlichen Trigeminal Nerven wurd.......
Für die Entwicklung von murinen Hypophysen, wurde es technisch schwierig, geeignete koronalen Abschnitte aufgrund ihrer winzig und zerbrechlich Funktionen und anatomische Besonderheiten6,8zu erhalten. Einige Forschungsgruppen wählte somit Mitte sagittale Abschnitte, die Morphologie der embryonalen und neonatale Hypophyse11,12zu analysieren. Mitte-sagittale Abschnitt der Hypophyse kann aber auch zeigen v.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tools/Equipment | |||
Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reagents | |||
Urethane | BBI | EB0448 | |
NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
NaNO2 | Sigma | 237213 | |
Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
Ethanol | SCR | 10009218 | |
Xylene | SCR | 10023418 | |
Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
antibody | Pituitary Program | ||
Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
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