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Developmental Biology

Dissektion und koronale Slice Vorbereitung Maus Hypophyse zu entwickeln

Published: November 16th, 2017

DOI:

10.3791/56356

1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll zur Hypophyse zu sezieren und bereiten Hypophyse koronalen Abschnitte von Mäusen zu entwickeln.

Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase. Es besteht aus zwei Drüsen mit getrennten embryonale Herkunft und Funktionen – die Neurohypophysis und die Adenohypophysis. Die entwickelnden Maus pituitäre Drüse ist klein und zart mit eine längliche ovale Form. Ein koronaler Abschnitt wird bevorzugt, um die Adenohypophysis und Neurohypophysis in eine einzige Scheibe der Hypophyse Maus angezeigt.

Das Ziel dieses Protokolls ist es, richtige Hypophyse koronalen Abschnitte mit gut erhaltenen Gewebe Architekturen aus Entwicklungsländern Mäuse zu erreichen. In diesem Protokoll beschrieben detailliert wie man sezieren und Prozess Hypophyse richtig von Mäusen zu entwickeln. Erstens werden Mäuse durch Transcardial Perfusion von Formaldehyd vor der Präparation fixiert. Dann sind drei verschiedene sezierenden Techniken angewendet, um intakte Hypophyse je nach Alter von Mäusen zu erhalten. Für Fetale Mäuse bis 4 Tage embryonalen Tag(e) 17,5-18,5 und Neugeborene bis Jahren, werden die gesamte Sella Regionen einschließlich Sphenoid Knochen, Drüse und Trigeminal Nerven indiziert. Für Welpen sind Alter postnatale Tagen (P) 5-14, der Hypophyse verbunden mit Trigeminal Nerven als Ganzes seziert. Bei Mäusen über 3 Wochen alt sind die Hypophyse sorgfältig frei aus dem umliegenden Gewebe seziert. Gewusst wie: der Hypophyse einbetten in eine korrekte Ausrichtung mithilfe der umgebenden Gewebe als Landmarken zu befriedigen koronalen Abschnitte anzeigen Diese Methoden sind hilfreich bei der Analyse von histologischer und Entwicklungsstörungen Funktionen der Hypophyse bei der Entwicklung von Mäusen.

Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase1,2. Anatomisch ist die Hypophyse eine '' Two-in-One'' Struktur bestehend aus der Neurohypophysis und der Adenohypophysis. Diese Teile haben unterschiedliche embryonale Herkunft und Funktion sehr unterschiedlich. Die Neurohypophysis ergibt sich aus der neuralen Ektoderm und sondert Oxytocin und Antidiuretic Hormon. Die Adenohypophysis stammt aus Rathkes-Tasche und ist verantwortlich für die Freisetzung von Hormonen wie Wachstumshormon, Prolaktin, Schilddrüsenhormone – Förderung, Follikel –....

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C57BL/6 Mäusen werden in bestimmten Pathogen-freies Bedingungen gezüchtet. Alle tierische experimentellen Methoden sind nach den Richtlinien von Animal Care und Ethikkommission medizinischen Universität zweiten Militär genehmigt.

1. Dissektion der postnatalen Entwicklung Hypophyse

  1. Perform-Anästhesie: Neugeborene Mäuse (P0 - P5) auf zerstoßenem Eis induzieren Hypothermie zu platzieren. Injizieren Sie bei Mäusen, die älter als 5 Tage alt 5 % Urethan (30 µL/g Körpergewicht).......

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Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Hypophyse aus Entwicklungsländern Mäuse zu sezieren. Für die Neugeborenen Maus, die gesamte Sella-Regionen mit der Hypophyse, die Trigeminal Nerven und der Unterseite Sphenoid Knochen wurden heraus von der Schädelbasis seziert. Die kleinen und zarten Hypophyse intakt geblieben während des Prozesses (Abbildung 1A). Bei Mäusen, die älter als 5 Tage, der Hypophyse, befestigt an den seitlichen Trigeminal Nerven wurd.......

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Für die Entwicklung von murinen Hypophysen, wurde es technisch schwierig, geeignete koronalen Abschnitte aufgrund ihrer winzig und zerbrechlich Funktionen und anatomische Besonderheiten6,8zu erhalten. Einige Forschungsgruppen wählte somit Mitte sagittale Abschnitte, die Morphologie der embryonalen und neonatale Hypophyse11,12zu analysieren. Mitte-sagittale Abschnitt der Hypophyse kann aber auch zeigen v.......

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Diese Arbeit wurde durch die Zuschüsse aus dem National Natural Science Foundation of China (31201086, 31470759 und 31671219) und Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900) unterstützt.

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NameCompanyCatalog NumberComments
Tools/Equipment
Surgical scissors-straightJinZhongJ21010can be purchased from other vendors
Fine scissors-strainghtJinZhongWA1010can be purchased from other vendors
Blunt forcepsJinZhongJD1020can be purchased from other vendors
Fine forcepsDumontRS-5015for isolation of the pituitary
26G (0.45mm) needleHongDafor transcardial perfusion
Syringe (1 mL)BD300841can be purchased from other vendors
Syringe (10 mL)BDcan be purchased from other vendors
35mm dishCorning430165can be purchased from other vendors
Lens cleaning paperShuangQuancan be purchased from other vendors
Anatomical microscopeOLYMPUSSZX-ILLB2-200can be purchased from other vendors
Embedding cassetteThermo Fisher22-272423can be purchased from other vendors
Tissue embedding console systemKEDEEKD-BM11can be purchased from other vendors
MicrotomeThermo FisherHM315Rcan be purchased from other vendors
Superfrost-Plus slidesThermo Fisher22-037-246can be purchased from other vendors
Cover glassThermo Fisher12-543can be purchased from other vendors
Fluorescence microscopeOLYMPUSBH2-RFCAcan be purchased from other vendors
NameCompanyCatalog NumberComments
Reagents
UrethaneBBIEB0448
NaClSigmaS9625for PBS
KClSigmaP9541for PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650for PBS
K2HPO4SigmaP2222for PBS
NaNO2Sigma237213
Heparin Sodium InjectionSPHH31022051for perfusion saline
Paraformaldehyde (PFA)SigmaP6148
EthanolSCR10009218
XyleneSCR10023418
ParaffinThermo Fisher8330
HematoxylinSigmaH9627for H&E staining
Eosin YSigmaE4009for H&E staining
rabbit anti growth hormone (GH)National Hormonefor immunostaining
antibodyPituitary Program
Rabbit anti-mouse GFAP antibodySigmaG9269for immunostaining
Goat anti-rabbit IgG, HRPJackson111-035-003for immunostaining
TSA systemNEN Life Science ProductsNEL700for immunostaining
Streptavidin, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356for immunostaining
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090for immunostaining

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