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Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Developmental Biology
विच्छेदन और राज्याभिषेक टुकड़ा माउस पिट्यूटरी ग्रंथि के विकास की तैयारी
हम टुकड़े पिट्यूटरी ग्रंथियों के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद है और चूहों के विकास से पिट्यूटरी राज्याभिषेक वर्गों को तैयार.
पिट्यूटरी ग्रंथि या hypophysis एक महत्वपूर्ण अंत में स्रावी अंग स्रावी हार्मोन homeostasis के लिए आवश्यक है । यह अलग भ्रूण मूल और कार्यों के साथ दो ग्रंथियों के होते है-neurohypophysis और adenohypophysis । विकासशील माउस पिट्यूटरी ग्रंथि छोटे और नाजुक एक लंबी अंडाकार आकार के साथ है । एक राज्याभिषेक अनुभाग माउस पिट्यूटरी का एक टुकड़ा में दोनों adenohypophysis और neurohypophysis प्रदर्शित करने के लिए पसंद है.
इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य चूहों के विकास से अच्छी तरह से संरक्षित ऊतक वास्तुकला के साथ उचित पिट्यूटरी राज्याभिषेक वर्गों को प्राप्त करने के लिए है । इस प्रोटोकॉल में, हम विस्तार से वर्णन कैसे टुकड़े और प्रक्रिया पिट्यूटरी ग्रंथियों ठीक से चूहों के विकास से । पहला, चूहों विच्छेदन करने से पहले formaldehyde के transcardial छिड़काव द्वारा तय कर रहे हैं. तो फिर तीन अलग विदारक तकनीक चूहों की उम्र के आधार पर बरकरार पिट्यूटरी ग्रंथियों को प्राप्त करने के लिए लागू कर रहे हैं. भ्रूण के लिए चूहों आयु वर्ग के भ्रूण (ई) १७.५-१८.५ और नवजात अप करने के लिए 4 दिन, फन्नी हड्डी, ग्रंथि, और, सेलला सहित संपूर्ण क्षेत्रों में विच्छेदित कर रहे हैं । प्रसव दिन आयु वर्ग के पिल्ले के लिए (पी) 5-14, पिट्यूटरी नसों के साथ जुड़े हुए एक समग्र रूप से कीट ग्रंथियों. 3 सप्ताह से अधिक पुराने चूहों के लिए, पिट्यूटरी ग्रंथियों ध्यान से आसपास के ऊतकों से मुक्त विच्छेदित कर रहे हैं. हम यह भी प्रदर्शित कैसे एक उचित अभिविंयास में पिट्यूटरी ग्रंथियों के लिए स्थलों के रूप में आसपास के ऊतकों का उपयोग करके संतोषजनक राज्याभिषेक वर्गों को प्राप्त करने के लिए एंबेड । इन पद्धतियों चूहों के विकास में पिट्यूटरी ग्रंथियों के ऊतकीय और विकासात्मक सुविधाओं का विश्लेषण करने में उपयोगी होते हैं ।
पिट्यूटरी ग्रंथि या hypophysis एक महत्वपूर्ण अंत में स्रावी अंग स्रावी हार्मोन homeostasis1,2के लिए आवश्यक है । शारीरिक, पिट्यूटरी ग्रंथि एक ' ' दो में एक ' ' संरचना neurohypophysis और adenohypophysis से मिलकर है । इन भागों अलग भ्रूण मूल और समारोह बहुत अलग है । neurohypophysis तंत्रिका बाह्यत्वक और स्राव ऑक्सीटोसिन और एन्टिडाययूरेटिक हार्मोन से प्राप्त होता है । adenohypophysis Rathke की थैली से शुरू होता है और वृद्धि हार्मोन, प्रोलैक्टिन, थायराइड उत्तेजक हार्मोन, कूप उत्तेजक हार्मोन, luteinizing हार्मोन, adrenocorticotropic हार्मोन सहित हार्मोन की रिहाई के लिए जिंमेदार है, और melanocyte-उत्तेजक हार्मोन
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tools/Equipment | |||
| Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
| Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
| Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
| Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
| 26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
| Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
| Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
| 35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
| Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
| Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
| Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
| Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
| Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
| Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
| Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
| Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Urethane | BBI | EB0448 | |
| NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
| KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
| Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
| K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
| NaNO2 | Sigma | 237213 | |
| Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Xylene | SCR | 10023418 | |
| Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
| Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
| Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
| rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
| antibody | Pituitary Program | ||
| Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
| Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
| TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
| Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
| Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
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