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Developmental Biology

郭清とコロナのスライス標本マウス下垂体腺の開発

Published: November 16th, 2017

DOI:

10.3791/56356

1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

下垂体腺の解剖し、マウスを開発から下垂体のコロナ セクションを準備するためのプロトコルを提案します。

下垂体または下垂体は重要な内分泌臓器の恒常性に不可欠なホルモンを分泌します。別の胚起源と機能と 2 つの腺で構成されています — 後葉と下垂。小型で細長い楕円形と繊細な開発マウス下垂体です。マウス下垂体の単一のスライスで下垂前葉と後葉の両方を表示する冠状断面お勧めします。

このプロトコルの目的は、マウスを開発してからの手入れが行き届いた組織アーキテクチャで適切な下垂体のコロナ セクションを達成することです。このプロトコルでは解剖およびマウスを開発から正常下垂体腺を処理する方法詳細に述べる。まず、マウス解剖前にホルムアルデヒドの transcardial 灌流を固定です。3 つの異なる解剖技術はマウスの年齢に応じてそのまま下垂体腺を取得に適用されます。胎児マウス高齢者胚日 (E) 17.5 18.5 と新生児を 4 日間に、蝶形骨、腺、および三叉神経を含む全体のセッラ地域は解剖します。子犬の高齢生後 (P) 5-14、下垂体腺、三叉神経接続は全体として解剖しました。以上 3 週齢のマウスに、下垂体腺は周囲の組織から無料解剖慎重に。コロナ セクションを満たすを取得するランドマークとして周囲の組織を使用して、適切な方向に下垂体腺を埋め込む方法も表示されます。これらのメソッドは、マウスの開発に下垂体腺の組織学的・発達的特徴を分析に役立ちます。

下垂体または下垂体が恒常性1,2のために不可欠なホルモンを分泌する重要な内分泌器官です。解剖学的, 下垂体腺、後葉と下垂から成る「2 台」構造です。これらの部品がある異なる胚起源と機能非常に異なる。後葉は神経外胚葉由来、オキシトシンと抗利尿ホルモンを分泌します。下垂ラトケ嚢に由来、成長ホルモン、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、副腎皮質刺激ホルモンを含むホルモンのリリースを担当し、メラニン細胞刺激ホルモンの3,4,5

下垂体腺は、マウス頭蓋骨の蝶形骨 (鞍) の背側表面にかかっている、壊れやすい茎によって脳の床にアタッチされます。三叉神経と前方視交叉67それは横方向に囲まれています。腺は細長い楕円形で、その軸に垂直に頭を。背側表面の後葉と下垂することができます簡単に区切られ、背側内側領域と腹の横と、後者の拡張を占める前者で。生後発達期下垂体のサイズが誕生8,....

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c57bl/6 マウス特定病原体フリーの条件で飼育しています。すべての動物実験、動物実験、第二軍医大学の倫理委員会で承認されたガイドラインに準拠しています

1。 郭清の生後開発下垂

  1. 実行麻酔: 低体温症を誘導するために砕いた氷を新生児マウス (P0 - P5) を配置。マウスの年齢の 5 日間以上、麻酔を誘導するために 5% ウレタン (体重の 30 μ L/g) を腹腔内注入?.......

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このプロトコルはマウスを開発から下垂体腺を分析する手法を示す.新生児マウス下垂体, 三叉神経と下を含む全体のセッラ地域の蝶形骨は頭蓋底からうち解剖されました。小型で繊細な下垂体腺はプロセス (図 1 a) の中にそのまま残った。5 日間以上のマウスの横の三叉神経に接続されている下垂体腺は当時孤立しました。マウスがよく保持され.......

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ネズミの脳下垂体を開発するための小さくて壊れやすい機能と解剖学的特徴6,8により適切なコロナ セクションを得ることが技術的に困難だった。いくつかの研究グループは従って萌芽期・新生児下垂体11,12の形態を分析する半ば矢状のセクションを選んだ。下垂体の半ば矢状断面が前方、中間を示すこと.......

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この作品は、国家自然科学基金、中国の (31201086、31470759、31671219) と上海自然科学財団 (12ZR1436900) からの補助金によって支えられました。

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NameCompanyCatalog NumberComments
Tools/Equipment
Surgical scissors-straightJinZhongJ21010can be purchased from other vendors
Fine scissors-strainghtJinZhongWA1010can be purchased from other vendors
Blunt forcepsJinZhongJD1020can be purchased from other vendors
Fine forcepsDumontRS-5015for isolation of the pituitary
26G (0.45mm) needleHongDafor transcardial perfusion
Syringe (1 mL)BD300841can be purchased from other vendors
Syringe (10 mL)BDcan be purchased from other vendors
35mm dishCorning430165can be purchased from other vendors
Lens cleaning paperShuangQuancan be purchased from other vendors
Anatomical microscopeOLYMPUSSZX-ILLB2-200can be purchased from other vendors
Embedding cassetteThermo Fisher22-272423can be purchased from other vendors
Tissue embedding console systemKEDEEKD-BM11can be purchased from other vendors
MicrotomeThermo FisherHM315Rcan be purchased from other vendors
Superfrost-Plus slidesThermo Fisher22-037-246can be purchased from other vendors
Cover glassThermo Fisher12-543can be purchased from other vendors
Fluorescence microscopeOLYMPUSBH2-RFCAcan be purchased from other vendors
NameCompanyCatalog NumberComments
Reagents
UrethaneBBIEB0448
NaClSigmaS9625for PBS
KClSigmaP9541for PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650for PBS
K2HPO4SigmaP2222for PBS
NaNO2Sigma237213
Heparin Sodium InjectionSPHH31022051for perfusion saline
Paraformaldehyde (PFA)SigmaP6148
EthanolSCR10009218
XyleneSCR10023418
ParaffinThermo Fisher8330
HematoxylinSigmaH9627for H&E staining
Eosin YSigmaE4009for H&E staining
rabbit anti growth hormone (GH)National Hormonefor immunostaining
antibodyPituitary Program
Rabbit anti-mouse GFAP antibodySigmaG9269for immunostaining
Goat anti-rabbit IgG, HRPJackson111-035-003for immunostaining
TSA systemNEN Life Science ProductsNEL700for immunostaining
Streptavidin, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356for immunostaining
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090for immunostaining

  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
  4. Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
  5. Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
  6. Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
  7. Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
  8. Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
  9. Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
  10. Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
  11. Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
  12. Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
  13. Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
  14. Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).

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