Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Developmental Biology
우리는 뇌 하 수 체 동맥 해 부 개발 쥐에서 뇌 코로나 섹션을 준비 하는 프로토콜을 제시.
뇌 하 수 체 또는 hypophysis 항상성에 필수적인 호르몬을 분 비 하는 중요 일 분 비 기관 이다. 그것은 별도 배아 기원과 기능을 가진 두 개의 동맥 이루어져 있다-는 neurohypophysis와는 adenohypophysis. 개발 마우스 뇌 하 수 체는 길쭉한 타원형 모양으로 섬세 하 고 작은. 마우스 뇌 하 수 체의 단일 조각에 adenohypophysis 및 neurohypophysis를 표시 하는 코로나 섹션 선호 된다.
이 프로토콜의 목표 달성 마우스 개발에서 잘 보존 된 조직 구조와 적절 한 뇌 코로나 섹션 것입니다. 이 프로토콜에서 우리 자세히 해 부 제대로 개발 하는 쥐에서 뇌 하 수 체 분 비를 처리 하는 방법을 설명 합니다. 첫째, 쥐 해 부 하기 전에 포름알데히드의 transcardial 관류에 의해 고정 됩니다. 다음 세 가지 다른 해 기술 쥐의 나이 따라 그대로 뇌 하 수 체 땀 샘을 얻을에 적용 됩니다. 태아 쥐 세 일 최대 배아 일 (전자) 17.5-18.5와 신생아, trigeminal 신경, 동맥, 설상 골을 포함 하 여 전체 sella 지구는 해 부. 강아지에 대 한 세 출생 후 일 (P) 5 월 14 일, 뇌 하 수 체 땀 샘 삼차 신경으로는 전체적으로 해 부. 마우스 3 주 이상, 뇌 하 수 체 분 비는 신중 하 게 해 부 무료 주변 조직에서. 우리는 또한 코로나 섹션 만족을 얻기 위해 주변 조직 랜드마크로 서 사용 하 여 적절 한 방향에서 뇌 하 수 체 땀 샘을 포함 하는 방법을 표시 합니다. 이 메서드는 마우스 개발에 뇌 하 수 체 동맥의 조직학 및 발달 기능 분석에 유용 합니다.
뇌 하 수 체 또는 hypophysis 항상성1,2에 필수적인 호르몬을 분 비 하는 중요 일 분 비 기관 이다. 해부학, 뇌 하 수 체는 neurohypophysis와는 adenohypophysis 구성 된 ' 2-에-하나 ' 구조 이다. 이 부분 매우 다르게 다른 배아 기원과 기능 있다. neurohypophysis 신경 ectoderm에서 파생 되 고 옥 시 토 신과 antidiuretic 호르몬을 secretes. adenohypophysis Rathke의 주머니에서 유래 되며 성장 호르몬, 갑 상선-자극 호르몬, 여 포-자극 호르몬, 황 호르몬, prolactin adrenocorticotropic 호르몬 등 호르몬의 출시에 대 한 책임 및 melanocyte-자극 호르몬3,,45.
뇌 하 수 체 마우스 두개골의 설상 골 (sella turcica)의 등 쪽 표면에 그리고 연약한 줄기로는 뇌의 바닥에 연결. 삼차 신경 및 anteriorly 광학 chiasm
C57BL/6 마우스 특정 병원 체 자유로운 조건에서 사육 된다. 동물 관리 및 두 번째 군사 의학 대학에서 윤리 위원회에 의해 승인 지침 준수는 모든 동물 실험 방법.
1. 해 부의 출생 후 개발 뇌
이 프로토콜 개발 쥐에서 뇌 하 수 체 동맥 해 부 하는 메서드를 제공 합니다. 신생아 마우스, 뇌 하 수 체, 삼차 신경 및 아래를 포함 하는 전체 sella 지역 설상 뼈 두개골의 기지에서 밖으로 해 부 했다. 작고 섬세 한 뇌 하 수 체 (그림 1A) 과정에서 그대로 남아. 5 일 보다 오래 된 마우스 측면 trigeminal 신경에 연결 된 뇌 하 수 체 분 비 했다 다음 격리. ?.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tools/Equipment | |||
Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reagents | |||
Urethane | BBI | EB0448 | |
NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
NaNO2 | Sigma | 237213 | |
Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
Ethanol | SCR | 10009218 | |
Xylene | SCR | 10023418 | |
Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
antibody | Pituitary Program | ||
Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
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