Disseksjon og koronale del forberedelse for å utvikle musen hypofysen

Vi presenterer en protokoll for å analysere hypofysen kjertler og forberede hypofysen framskaffet fra utviklingsland mus.

Hypofyse eller hypofysen er en viktig endokrine organ sekresjon hormoner avgjørende for homeostase. Det består av to kjertler separat embryonale opprinnelse og funksjoner-neurohypophysis og adenohypophysis. Utvikle musen hypofysen er liten og delikat med en langstrakt oval form. En koronale delen er foretrukket å vise både adenohypophysis og neurohypophysis i et enkelt stykke musen hypofysen.

Målet med denne protokollen er å oppnå riktig hypofysen framskaffet med velbevarte vev arkitekturer fra utviklingsland mus. I denne protokollen beskrive vi i detalj hvordan å dissekere og behandle hypofysen kjertler riktig fra utviklingsland mus. Først repareres mus av transcardial perfusjon av formaldehyd før disseksjon. Tre ulike dissecting teknikker brukes deretter for å få intakt hypofysen kjertler avhengig av alderen på mus. For fosterets mus alderen embryonale dager (E) 17,5-18,5 og nyfødte opp til 4 dager, er hele sella områdene inkludert sphenoid bein, kjertel og trigeminal nerve dissekert. For pups er alderen postnatal dager (P) 5-14, hypofysen kjertler knyttet trigeminal nerve dissekert som helhet. For mus over 3 uker gamle, er hypofysen kjertler omhyggelig dissekert gratis fra omkringliggende vev. Vi viser også hvordan å bygge hypofysen kjertler i en riktig retning ved hjelp av omkringliggende vev som landemerker for å oppnå tilfredsstillende framskaffet. Disse metodene er nyttige i å analysere histologiske og utviklingsmessige funksjoner i hypofysen kjertler utvikle mus.

Hypofyse eller hypofysen er en viktig endokrine organ sekresjon hormoner nødvendig for homeostase^1,2. Anatomisk, er hypofysen en '' to-i-ett '' struktur bestående av neurohypophysis og adenohypophysis. Disse delene har forskjellige embryonale opprinnelse og funksjonen veldig annerledes. Neurohypophysis er avledet fra den nevrale ektoderm og utskiller oksytosin og antidiuretic hormon. Adenohypophysis kommer fra Rathkes pose og er ansvarlig for utgivelsen av hormoner, inkludert veksthormon, prolaktin, skjoldbrusk - stimulerende hormone, follicle - stimulerende hormone, luteiniserende hormon, adrenocorticotropic ....

C57BL/6 mus er avlet i bestemte patogen uten betingelser. Alle dyr eksperimentelle metoder er fulgt retningslinjene godkjent av Animal Care og etikk på andre militære medisinske universitet.

1. Disseksjon av Postnatal utvikling hypofysen

1. utføre anestesi: plassere neonatal mus (P0 - P5) på knust is å indusere nedkjøling. For mus eldre enn 5 dager gammel, injisere 5% uretan (30 µL/g kroppsvekt) intraperitoneally for å indusere anestesi. Vurdere reaksjoner på halen/toe pinche.......

Denne protokollen gir en metode for å analysere hypofysen kjertler fra utviklingsland mus. Neonatal musen, hele sella områdene inneholder hypofysen, trigeminal nerver og undersiden sphenoid bein ble dissekert ut fra skull base. Hypofysen lille og delikat forblitt intakt i løpet av prosessen (figur 1A). Mus eldre enn 5 dager, hypofysen kjertler knyttet til laterale trigeminal nervene var så isolert. Brutto strukturen til hypofysen isolert fra P7 musen var .......

Utvikle murine pituitaries, har det vært teknisk vanskelig å få riktig framskaffet sine små og skjøre og unike Anatomiske egenskaper^6,8. Noen forskningsgrupper derfor valgte midt-sagittal deler analysere morfologi av embryonale og neonatal hypofysen^11,12. Skjønt den midt-sagittal delen av hypofysen er likeledes dugelig av viser fremre, middels og bakre fliker i et enkelt stykke, den koronale delen e.......

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation i Kina (31201086, 31470759 og 31671219) og Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900).