Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Developmental Biology
Мы представляем протокол вскрыть гипофиза и подготовить гипофиза коронковой части из развивающихся мышей.
Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза. Он состоит из двух желез с отдельным эмбриональное происхождение и функций — neurohypophysis и adenohypophysis. Развивающихся гипофиза мыши маленькие и тонкие с удлиненной овальной формы. Корональных разделе предпочтителен для отображения в adenohypophysis и neurohypophysis в один срез гипофиза мыши.
Целью настоящего Протокола является достижение надлежащего гипофиза корональных секции с архитектурами хорошо сохранившиеся ткани из развивающихся мышей. В этом протоколе мы подробно описывают, как анализировать и обрабатывать гипофиза правильно из развивающихся мышей. Во-первых мыши фиксируются transcardial перфузии формальдегида до вскрытия. Затем три различных рассечения методы применяются для получения нетронутыми гипофиза в зависимости от возраста мышей. Для плода мышей возрасте от новорожденных и эмбриональных дней (E) 17.5-18,5 до 4 дней, разделяются всей Селла регионов, включая клиновидной кости, железы и тройничного нервов. Для щенков возрасте послеродовой (P) 5-14 дней, гипофиза связано с тройничного нервов разделяются в целом. Для мышей более 3 недель гипофиза тщательно расчлененный бесплатно от окружающих тканей. Мы также отображать как внедрять гипофиза в надлежащей ориентации с помощью окружающих тканей как ориентиры для получения удовлетворяющих корональных секций. Эти методы полезны при анализе гистологические и развития функции гипофиза в разработке мышей.
Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза1,2. Анатомически гипофиз является '' два в одном '' структура, состоящая из neurohypophysis и adenohypophysis. Эти компоненты имеют разные эмбриональное происхождение и функции очень по-разному. Neurohypophysis является производным от нейронных эктодермы и выделяет окситоцина и антидиуретического гормона. Adenohypophysis происходит от Ратке в мешочек и несет ответственность за освобождение гормонов, в том числе гормон роста, пролактина, тиреотропный гормон, фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего г....
мышей C57BL/6 разводят в конкретных условиях возбудителя бесплатно. Всех животных экспериментальные методы в соответствии с руководящими принципами, утвержденными животное уход и Комитета по этике на второй военный медицинский университет.
1. рассечение из послеродового ?.......
Этот протокол предоставляет метод для того чтобы рассечь гипофиза из развивающихся мышей. Для новорожденных мыши, регионов всей Селла, содержащей гипофиза, тройничного нервов и под клиновидной кости были расчленены от основания черепа. Крошечные и деликатный гипофиз.......
Для разработки мышиных pituitaries, он был технически трудно получить правильное корональных секции из-за их маленькие и хрупкие особенности и уникальные анатомические характеристики6,8. Таким образом, некоторые исследовательские группы выбрал середине саги.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tools/Equipment | |||
Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reagents | |||
Urethane | BBI | EB0448 | |
NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
NaNO2 | Sigma | 237213 | |
Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
Ethanol | SCR | 10009218 | |
Xylene | SCR | 10023418 | |
Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
antibody | Pituitary Program | ||
Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved