JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Acknowledgements

Materials

References

Developmental Biology

Вскрытие и подготовка корональных срез развития гипофиза мыши

Published: November 16th, 2017

DOI:

10.3791/56356

1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

Мы представляем протокол вскрыть гипофиза и подготовить гипофиза коронковой части из развивающихся мышей.

Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза. Он состоит из двух желез с отдельным эмбриональное происхождение и функций — neurohypophysis и adenohypophysis. Развивающихся гипофиза мыши маленькие и тонкие с удлиненной овальной формы. Корональных разделе предпочтителен для отображения в adenohypophysis и neurohypophysis в один срез гипофиза мыши.

Целью настоящего Протокола является достижение надлежащего гипофиза корональных секции с архитектурами хорошо сохранившиеся ткани из развивающихся мышей. В этом протоколе мы подробно описывают, как анализировать и обрабатывать гипофиза правильно из развивающихся мышей. Во-первых мыши фиксируются transcardial перфузии формальдегида до вскрытия. Затем три различных рассечения методы применяются для получения нетронутыми гипофиза в зависимости от возраста мышей. Для плода мышей возрасте от новорожденных и эмбриональных дней (E) 17.5-18,5 до 4 дней, разделяются всей Селла регионов, включая клиновидной кости, железы и тройничного нервов. Для щенков возрасте послеродовой (P) 5-14 дней, гипофиза связано с тройничного нервов разделяются в целом. Для мышей более 3 недель гипофиза тщательно расчлененный бесплатно от окружающих тканей. Мы также отображать как внедрять гипофиза в надлежащей ориентации с помощью окружающих тканей как ориентиры для получения удовлетворяющих корональных секций. Эти методы полезны при анализе гистологические и развития функции гипофиза в разработке мышей.

Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза1,2. Анатомически гипофиз является '' два в одном '' структура, состоящая из neurohypophysis и adenohypophysis. Эти компоненты имеют разные эмбриональное происхождение и функции очень по-разному. Neurohypophysis является производным от нейронных эктодермы и выделяет окситоцина и антидиуретического гормона. Adenohypophysis происходит от Ратке в мешочек и несет ответственность за освобождение гормонов, в том числе гормон роста, пролактина, тиреотропный гормон, фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего г....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

мышей C57BL/6 разводят в конкретных условиях возбудителя бесплатно. Всех животных экспериментальные методы в соответствии с руководящими принципами, утвержденными животное уход и Комитета по этике на второй военный медицинский университет.

1. рассечение из послеродового ?.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Этот протокол предоставляет метод для того чтобы рассечь гипофиза из развивающихся мышей. Для новорожденных мыши, регионов всей Селла, содержащей гипофиза, тройничного нервов и под клиновидной кости были расчленены от основания черепа. Крошечные и деликатный гипофиз.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Для разработки мышиных pituitaries, он был технически трудно получить правильное корональных секции из-за их маленькие и хрупкие особенности и уникальные анатомические характеристики6,8. Таким образом, некоторые исследовательские группы выбрал середине саги.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Эта работа была поддержана субсидии от национального естественных наук фонд Китая (31201086, 31470759 и 31671219) и Шанхай фонда естественных наук (12ZR1436900).

....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NameCompanyCatalog NumberComments
Tools/Equipment
Surgical scissors-straightJinZhongJ21010can be purchased from other vendors
Fine scissors-strainghtJinZhongWA1010can be purchased from other vendors
Blunt forcepsJinZhongJD1020can be purchased from other vendors
Fine forcepsDumontRS-5015for isolation of the pituitary
26G (0.45mm) needleHongDafor transcardial perfusion
Syringe (1 mL)BD300841can be purchased from other vendors
Syringe (10 mL)BDcan be purchased from other vendors
35mm dishCorning430165can be purchased from other vendors
Lens cleaning paperShuangQuancan be purchased from other vendors
Anatomical microscopeOLYMPUSSZX-ILLB2-200can be purchased from other vendors
Embedding cassetteThermo Fisher22-272423can be purchased from other vendors
Tissue embedding console systemKEDEEKD-BM11can be purchased from other vendors
MicrotomeThermo FisherHM315Rcan be purchased from other vendors
Superfrost-Plus slidesThermo Fisher22-037-246can be purchased from other vendors
Cover glassThermo Fisher12-543can be purchased from other vendors
Fluorescence microscopeOLYMPUSBH2-RFCAcan be purchased from other vendors
NameCompanyCatalog NumberComments
Reagents
UrethaneBBIEB0448
NaClSigmaS9625for PBS
KClSigmaP9541for PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650for PBS
K2HPO4SigmaP2222for PBS
NaNO2Sigma237213
Heparin Sodium InjectionSPHH31022051for perfusion saline
Paraformaldehyde (PFA)SigmaP6148
EthanolSCR10009218
XyleneSCR10023418
ParaffinThermo Fisher8330
HematoxylinSigmaH9627for H&E staining
Eosin YSigmaE4009for H&E staining
rabbit anti growth hormone (GH)National Hormonefor immunostaining
antibodyPituitary Program
Rabbit anti-mouse GFAP antibodySigmaG9269for immunostaining
Goat anti-rabbit IgG, HRPJackson111-035-003for immunostaining
TSA systemNEN Life Science ProductsNEL700for immunostaining
Streptavidin, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356for immunostaining
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090for immunostaining

  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
  4. Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
  5. Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
  6. Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
  7. Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
  8. Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
  9. Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
  10. Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
  11. Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
  12. Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
  13. Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
  14. Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved