Dissektion och koronalt Slice förberedelse att utveckla mus hypofysen

Vi presenterar ett protokoll för att dissekera hypofys och förbereda hypofysen koronalt avsnitt från att utveckla möss.

Den hypofysen eller hypofysen är ett viktigt endokrina organ som utsöndrar hormoner som är väsentliga för homeostas. Den består av två körtlar med separat embryonala ursprung och funktioner — neurohypophysis och i adenohypofysen. Utveckla mus hypofysen är mycket liten och delikat med en långsträckt oval form. En koronalt avsnitt föredras att visa både adenohypofysen och neurohypophysis i en enda bit av mus hypofysen.

Målet med detta protokoll är att uppnå korrekt hypofysen koronalt avsnitt med välbevarad vävnad arkitekturer från att utveckla möss. I detta protokoll beskriver vi i detalj hur du dissekera och bearbetar hypofys ordentligt från att utveckla möss. Först, möss har fastställts genom transcardial perfusion av formaldehyd före dissektion. Sedan tillämpas tre olika dissekera tekniker för att erhålla intakt hypofys beroende på ålder av möss. För fostrets möss åldern embryonala dagar (E) 17,5-18,5 och nyfödda upp till 4 dagar, är hela sella regioner inklusive sphenoid benet, körtel och trigeminal nerver dissekeras. För valpar är åldern postnatal dagar (P) 5-14, hypofys ansluten med trigeminal nerver dissekerade som helhet. För möss över 3 veckor gammal, är hypofys noggrant dissekeras fri från de omgivande vävnaderna. Vi visar också hur till bädda in hypofys i en rätt orientering med omgivande vävnader som sevärdheter för att få tillfredsställa koronalt avsnitt. Dessa metoder är användbara i att analysera histologiska och utvecklingsmässiga egenskaper hos hypofys utveckla möss.

Den hypofysen eller hypofysen är ett viktigt endokrina organ som utsöndrar hormoner som är väsentliga för homeostas^1,2. Anatomiskt, är hypofysen en '' två-i-ett '' struktur bestående av neurohypophysis och i adenohypofysen. Dessa delar har olika embryonala ursprung och funktion mycket olikt. Neurohypophysis härrör från neural ektodermet och utsöndrar oxytocin och Antidiuretiskt hormon. I adenohypofysen påbörjar från Rathkes påse och ansvarar för frisättning av hormoner inklusive tillväxthormon, prolaktin, sköldkörtel - stimulerande hormon, follikelstimulerande hormon, luteiniserande hormon, adrenokortikotropt ....

C57BL/6 möss föds i specifika patogenfria villkor. Alla djur experimentella metoder är i överensstämmelse med de riktlinjer som godkänts av djur vård och etiska kommittén vid andra militära medicinska universitet.

1. dissektion av Postnatal utveckling hypofysen

1. utför anestesi: placera neonatala möss (P0 - P5) på krossad is att inducera hypotermi. För möss äldre än 5 dagar gammal, injicera 5% uretan (30 µL/g kroppsvikt) intraperitonealt inducera anestesi. Bedöma sv.......

Detta protokoll presenterar en metod för att dissekera hypofys från att utveckla möss. För neonatal musen, Regionkommittén hela sella som innehåller hypofysen, trigeminusneuralgi nerverna och undersidan sphenoid benet var dissekeras ut från skallbasen. Små och ömtåliga hypofysen förblivit intakt under processen (figur 1A). För möss äldre än 5 dagar, hypofys bifogas laterala trigeminal nerverna då var isolerade. Grov struktur i hypofysen isoler.......

För att utveckla murina nekrohypofyser, har det varit tekniskt svårt att få ordentlig koronalt avsnitt på grund av sina små och ömtåliga funktioner och unika anatomiska egenskaper^6,8. Vissa forskargrupper valde därför mid-sagittal avsnitt att analysera morfologi av embryonala och neonatal hypofysen^11,12. Dock avsnittet mid-sagittal i hypofysen är också kapabel att visar främre, mellanliggande .......

Detta arbete stöds av anslag från National Natural Science Foundation Kina (31201086, 31470759 och 31671219) och Shanghai naturvetenskap Foundation (12ZR1436900).