Dissecção e cultura de explante de murino alantoide para a análise In Vitro de fixação alantoico

Descrevemos um ensaio em vitro de fixação corioalantoicas de modelo, o primeiro passo na formação da placenta. O protocolo demonstra a cultura de dissecção e explante de murino allantoides em imobilizado α4β1 integrina. Acessório de alantoide é avaliado microscopicamente em pontos de tempo pré-determinado.

A placenta é essencial para o crescimento e o desenvolvimento de embriões de mamíferos. Por este motivo, inúmeras alterações genéticas e insultos ambientais também prováveis que perturbam o desenvolvimento da placenta ou função podem causar perda de gravidez precoce em ratos e seres humanos. No entanto, simples em vitro ensaios para a tela para potenciais efeitos sobre a formação da placenta são escassos. Aqui, focalizamos o primeiro e fundamental passo na formação da placenta, que consiste de penhora do alantoide com o cório de modelagem. Nós descrevemos um método para avaliar rapidamente o acessório de explantes alantoico na imobilizado α4β1 integrina, que serve como substrato cório-mimética. Esta abordagem in vitro permite uma avaliação qualitativa do acessório e espalhando o comportamento de vários explantes alantoide em pontos diferentes vez consecutiva. O protocolo pode ser usado para investigar o efeito de mutações específicas do mouse, drogas ou vários fatores ambientais que têm sido associados a complicações na gravidez ou perda fetal no alantoide acessório ex vivo.

A placenta é indispensável para o crescimento embrionário e desenvolvimento no ambiente uterino. Constitui a interface para o oxigênio, metabólito e troca de nutrientes entre a circulação fetal e materna e também funções como órgão endócrino e imunológico. Qualquer insulto endógeno ou exógeno que prejudica o desenvolvimento da placenta pode levar a retardo de crescimento intra-uterino, perda fetal ou complicações na gravidez, tanto em ratos e em seres humanos¹. Enquanto o número de mutações específicas do mouse que causam fisiologia placentária anormal continua a aumentar², com 219 genótipos atualmente listados no site d....

Reprodução de rato foi aprovada pelo Regierung Unterfranken, e todas as análises foram realizadas em estrita conformidade com todos os alemão e da União Europeia leis e regulamentos aplicáveis relativos ao uso de animais de laboratório e cuidados.

1. revestimento de microtitulação placas com α4β1 integrina para Ex Utero Allantois explante cultura

1. Reconstitua a liofilizado murino α4β1 integrina a 200 µ g/mL em salina tampão fosfato (PBS). Dilua para uma concent.......

Este protocolo descreve um método para isolar e explantes murino allantoides ex vivoe detalha a avaliação qualitativa do alantoide penhora a α4β1 integrina, um processo crítico durante na vivo corioalantoicas fusão. Os representante resultados mostrados na figura 1A–H demonstram as etapas sucessivas de isolamento alantoide a partir do útero gestante. Tecidos maternos que cercam os cornos uterinos, .......

Na presença de soro, que é uma fonte rica de moléculas pro-adesivo da matriz extracelular como a fibronectina, explantes alantoide prontamente irão anexar vários plástico, vidro ou superfícies de filtro^9,16. Assim, se o objectivo do ensaio realizado é especificamente investigar o efeito de uma modificação genética ou qualquer outro tratamento no acessório alantoide para imobilizado α4β1, é fundamental para bloquear sites de ligação não-específi.......

Este trabalho foi apoiado pela Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB688 (para A.G.).