חיתוך, צביעה של השחלות הגולמי דרוזופילה

השחלה דרוזופילה הוא מערכת דגם מעולה ללימוד פיתוח גומחת תאי גזע. על פי שיטות ניקוד השחלות זחל ומבוגרים פורסמו, השחלה הגולמי והניתוחים דורשות טכניקות שונות זה לא פורסמו בפירוט. כאן אנחנו חלוקה לרמות פרוטוקול לנתח, מכתים של הרכבה השחלות הגולמי.

בניגוד למבוגרים דרוזופילה שחלות, השחלות הגולמי קשים יחסית לגשת ולבדוק עקב שלהם קטן בגודל, טבלתי ו בפסליו בתוך תיק הגולמי. האתגר של לנתח השחלות הגולמי טמון גם המיקום הפיזי שלהם בתוך הגולם: השחלות מוקפים תאי שומן הגוף בבטן הגולמי, ויש להסירו תאי שומן אלה כדי לאפשר נוגדן המתאים מכתים. כדי להתגבר על האתגרים הללו, פרוטוקול זה מנצל pipets פסטר מותאם אישית כדי לחלץ את תאי הגוף שומן מהבטן הגולמי. יתר על כן, coverglass chambered משמש במקום צינור microcentrifuge במהלך תהליך צביעת כדי לשפר את הראות של הגלמים. עם זאת, למרות אלה, יתרונות נוספים של הכלים המשמשים פרוטוקול זה, ביצוע מוצלח של טכניקות אלה עשוי עדיין לכלול מספר ימי תרגול בשל גודלו הקטן של השחלות הגולמי. השיטות המתוארות ב פרוטוקול זה יכול לחול על זמן הקורס ניסויים שבהם מנותחים השחלות בשלבים שונים של פיתוח הגולמי.

מחקר תאי הגזע באמצעות דרוזופילה השחלות התרחב נרחב מאז התיעוד הראשון של תאי גזע נישה^1,2,3,4. בעקבות הפיתוח של שושלת היוחסין מעקב גנטי כלים, השחלה דרוזופילה והניתוחים שימשו נפוץ לחקר תאי הגזע שושלות, איתות המסלולים המסדירים תאי גזע תחזוקה, התפשטות, גורל גומחת תאי גזע. הידע של איתות המסלולים האלה עשוי להניב תובנות סיבות פוטנציאליות של סרטן שמקורן בתאי גזע aberrant פעילות^5,6,7. גם לאחרונה הוכח כי תאי גזע סומאטית בשחלה דרוזופילה

1. EggLaying

1. לשלב כ זכר עשר חמש עשרה הנשי דרוזופילה הזבוב הבוגר של גנוטיפ הרצוי בבקבוקון של אוכל עשיר לטוס רגיל בתוספת שמרים. כדי למנוע צפיפות יתר את המבחנה, לאפשר ובסיומה הנקבות להטיל ביצים לא יותר 2 – 4 h¹⁴.
2. להעביר את המבוגרים מ המבחנה לתוך בקבוקון חדש על-ידי הקשה את ה?.......

ביצוע מוצלח של הליך זה צריך לגרום נוגדן ברור מכתים החושפת את המבנה ואת הארגון הסלולר של השחלה הגולמי דרוזופילה . אימונוהיסטוכימיה המתוארות ב פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לזהות סוגי תאים בדרך כלל צבעונית של השחלות זחל ומבוגרים. תאים של הקנה הגולמי המופק נחיל תאים

השלב הקריטי ביותר וקשה של פרוטוקול זה כרוך הכנה הגולמי השחלות לפני קיבוע. כדי להבטיח השחלות, קטן והיא קבורה על-ידי תאי שומן הגוף בבטן הגולמי, מוכתמים מספיק נוגדנים, חשוב לא רק תקרע חור גדול בתוך השק בטן עם מלקחיים, אבל גם לחלץ תאי שומן הגוף ההגנתיים החוסמים השחלות של הנוגדנים. ביצוע מוצלח של .......

מחקר זה נתמך על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (RO1 GM079351 כדי D.K.). אנו מודים דורותיאה מפציר על לה עצות מועילות על השחלה הגולמי והניתוחים בהתבסס על הפרוטוקול המקורי שלה. אנו מודים גם איימי Reilein לה סיוע והערות על כתב היד.