Facendo, test e l'utilizzo di microelettrodi selettivo di ioni potassio in fettine di tessuto del cervello adulto

Gli ioni del potassio contribuiscono per il potenziale di membrana di riposo delle cellule e concentrazione extracellulare di K⁺ è un regolatore fondamentale dell'eccitabilità cellulare. Descriviamo come fare, calibrare e utilizzare monopolare K⁺-selettivi microelettrodi. Utilizzando tali elettrodi consente la misurazione delle dinamiche di concentrazione K⁺ elettricamente evocate nelle fette hippocampal adulti.

Gli ioni potassio contribuiscono in modo significativo per il potenziale di membrana di riposo delle cellule e, di conseguenza, la concentrazione extracellulare di K⁺ è un regolatore cruciale dell'eccitabilità delle cellule. Alterato le concentrazioni extracellulari di K⁺ effetto l'eccitabilità cellulare e potenziali di membrana riposo spostando gli equilibri tra stati chiusi, aperti e inattivati per canali ionici voltaggio-dipendenti che sono alla base di potenziale di azione Iniziazione e conduzione. Quindi, è prezioso per misurare direttamente extracellulare K⁺ dinamiche in salute e stati malati. Qui, descriviamo come fare, calibrare e utilizzare monopolare K⁺-selettivi microelettrodi. Li abbiamo distribuito in fette di cervello hippocampal adulto per misurare elettricamente evocate K⁺ concentrazione dinamica. L'uso giudizioso di tali elettrodi è una parte importante di tool-kit necessari per valutare i meccanismi biofisici e cellulari che controllano le concentrazioni extracellulari di K⁺ nel sistema nervoso.

Concentrazioni di ioni di potassio sono strettamente regolati nel cervello, e le loro fluttuazioni esercitano una potente influenza sul potenziale di membrana di riposo di tutte le cellule. Alla luce di questi contributi critici, un obiettivo importante di biologia è determinare i meccanismi biofisici e cellulari che vengono utilizzati per regolare strettamente la concentrazione di K⁺ nello spazio extracellulare in vari organi del corpo^{1 , 2}. un requisito importante in questi studi è la capacità di misurare le concentrazioni di K⁺ con precisione. Anche se molti componenti che contribuisco....

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con l'Istituto nazionale di guida alla salute per la cura e l'uso di animali da laboratorio e sono stati approvati dal comitato di ricerca degli animali del cancelliere presso la University of California, Los Angeles. Tutti i topi sono stati alloggiati con cibo e acqua disponibile ad libitum in un ambiente di luce-buio di 12 h. Tutti gli animali erano sani senza evidenti modifiche comportamentali, non sono stati coinvolti in studi precedenti .......

Per la determinazione selettiva di extracellulare K⁺, abbiamo preparato microelettrodi iono-selettivi, rivestiti con uno strato idrofobico attraverso silanizzazione delle pipette di vetro borosilicato pulito (Figura 1A). Questo rivestimento permette lo ionoforo K⁺ contenente valinomicina per riposare sulla punta dell'elettrodo e consentire solo K⁺ di flusso attraverso una stretta apertura presso la punta dell'elettrodo (

Il metodo che descriviamo qui ci ha permesso di valutare K⁺ dinamiche in risposta alla stimolazione elettrica dei collaterals Schaffer in fettine ippocampali acute da topi adulti. Il nostro metodo di preparazione K⁺ microelettrodi selettiva dello ione è simile a precedenti procedure descritte^12,13,14,15. Tuttavia, questo metodo presenta vantaggi rispetto alle configurazio.......

Il laboratorio di Khakh è stato sostenuto da NIH MH104069. Il laboratorio Mody è stato sostenuto da NIH NS030549. J.C.O. grazie Grant(NS058280) formazione di NIH T32 neurale microcircuiti.