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Bioengineering

ट्रैकिंग और इमेजिंग के लिए Correlative लाइट इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (भूखों) क्रायो-मैटीरियल कोशिकाओं में वायरल प्रोटीन संबद्ध संरचनाओं

Published: September 7th, 2018

DOI:

10.3791/58154

1European Molecular Biology Laboratory, 2Department of Infectious Diseases, Molecular Virology, Heidelberg University, 3Central Facility for Electron Microscopy, Ulm University, 4Heidelberg Partner Site, German Center for Infection Research

अपने उच्च संकल्प के कारण, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (EM) virologists के लिए एक अपरिहार्य उपकरण है । हालांकि, मुख्य कठिनाइयों का विश्लेषण जब उंहें वायरस संक्रमित या transfected कोशिकाओं के माध्यम से उंहें संक्रमण या अभिकर्मक की कम क्षमता है, इन कोशिकाओं की परीक्षा में बाधा । इस कठिनाई को दूर करने के लिए, प्रकाश माइक्रोस्कोपी (एल एम) पहले संक्रमित या transfected कोशिकाओं के उपजनसंख्या आवंटित करने के लिए प्रदर्शन किया जा सकता है । इस प्रकार, फ्लोरोसेंट प्रोटीन के उपयोग का लाभ लेने (एफपीएस) वायरल प्रोटीन से जुड़े, LM यहां प्रयोग किया जाता है "सकारात्मक-transfected" कोशिकाओं की स्थिति को रिकॉर्ड करने के लिए, एक FP व्यक्त और एक अल्फ़ांयूमेरिक पैटर्न के साथ एक समर्थन पर बढ़ रही है । बाद में, कोशिकाओं को आगे उच्च दबाव ठंड (HPF), फ्रीज प्रतिस्थापन (एफएस) और राल embedding के माध्यम से उंहें के लिए संसाधित कर रहे हैं । अल्ट्रा तेजी से ठंड कदम चयनित कोशिकाओं है कि तब संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (उनि) द्वारा ultrastructural स्तर पर विश्लेषण किया जा सकता है की उत्कृष्ट झिल्ली संरक्षण सुनिश्चित करता है । यहाँ, एक कदम दर कदम correlative प्रकाश इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (भूखों) कार्यप्रवाह प्रदान की जाती है, विस्तार में नमूना तैयारी, इमेजिंग और सहसंबंध का वर्णन. प्रायोगिक डिजाइन भी कई सेल जीव विज्ञान के सवालों के समाधान के लिए लागू किया जा सकता है ।

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