Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Biology
نقدم هنا بروتوكولا لتقدير الأيض معفن والجهاز التنفسي باحتواء النمو الأسى ل Saccharomyces cerevisiae لمعادلة النمو المتسارع. يسمح حساب المعلمات الحركية لفحص تأثيرات المواد/المركبات على التخمر أو التنفس المتقدرية.
الخلايا saccharomyces cerevisiae في المرحلة الأسية مواصلة نموها بإنتاج ATP عن طريق التخمير و/أو التنفس المتقدرية. أن تركيز الكربون تخمر أساسا يحكم كيفية توليد خلايا الخميرة ATP؛ وهكذا، يدفع التباين في مستويات تخمر الكربوهيدرات الأيض نشطة من S. cerevisiae. وتصف هذه الورقة أسلوب الفائق يقوم على نمو الخميرة الأسية لتقدير الآثار المترتبة على التغييرات تركيز وطبيعة مصدر الكربون في الأيض معفن والجهاز التنفسي. نمو S. cerevisiae يقاس صفيحة أو اهتزت المخروطية قارورة بواسطة تحديد الكثافة البصرية (OD) 600 نانومتر. ثم، هو بناها منحنى نمو OD رسم مقابل الوقت، مما يسمح بتحديد واختيار المرحلة الأسية، ومزودة بمعادلة النمو الأسى للحصول على معلمات الحركية. عموما تمثل معدلات نمو منخفضة محددة بإضعاف مضاعفة أعلى نمو الجهاز تنفسي. على العكس من ذلك، تشير معدلات نمو محددة مع انخفاض مرات مضاعفة النمو معفن. تقدر قيم العتبة لمضاعفة الوقت ومعدل نمو محددة باستخدام شروط الجهاز التنفسي أو معفن المعروفة جيدا، مثل مصادر الكربون غير تخمر أو تركيزات أعلى من تخمر السكريات. يتم الحصول على هذه لكل سلالة معينة. أخيرا، تتم مقارنة المعلمات الحركية المحسوبة بقيم العتبة تحديد ما إذا كانت الخميرة يظهر النمو معفن و/أو الجهاز التنفسي. وميزة هذا الأسلوب هو بساطتها النسبية لفهم آثار مادة/مجمع على الأيض معفن أو الجهاز التنفسي. من المهم تسليط الضوء على أن النمو عملية بيولوجية معقدة ومعقدة؛ ولذلك، البيانات الأولية من هذا الأسلوب يجب أن تؤكده التحديد الكمي لاستهلاك الأوكسجين وتراكم مشتقات التخمير. وبالتالي، يمكن استخدام هذا الأسلوب كفرز أولى للمركبات/المواد التي قد تخل أو تعزيز الأيض معفن أو الجهاز التنفسي.
النمو saccharomyces cerevisiae بمثابة أداة قيمة تحديد عشرات الآليات الفيزيولوجية والجزيئية. ويقاس النمو أساسا بثلاث طرق: تخفيف المسلسل لاختبار البقعة، ووحدة تشكيل مستعمرة العد، ومنحنيات النمو. يمكن استخدام هذه التقنيات وحدها أو في تركيبة مع مجموعة متنوعة من ركائز والظروف البيئية، وطفرات والمواد الكيميائية للتحقيق في استجابات محددة أو تعمل.
التنفس المتقدرية هو عملية بيولوجية فيها حركية النمو وقد طبقت بنجاح لاكتشاف آليات غير معروفة. وفي هذه الحالة، مصادر مكملات وسائط النمو مع الكربون غير تخمر مثل الجلسرين أو لاكتات الإيثانول (التي يستقلبان حصرا بالتنفس المتقدرية)، كما يسمح للكربون والطاقة هو المصدر الوحيد لتقييم نمو الجهاز التنفسي، ه....
1-وسائل الإعلام الثقافة وإعداد العدوى
يمكن استخدام منحنيات النمو للتمييز مبدئياً بين تعمل معفن والجهاز التنفسي في الخميرة S. cerevisiae . ولذلك، أجرينا الثقافات دفعة من س. سيريفيسيا (BY4742) بتركيزات مختلفة الجلوكوز التي أبلغ عنها لحفز النمو معفن: 1% و 2% و 10% (w/v)9. الثقافات التي تظهر النمط الظاهري م.......
لقد مر وقت طويل J. مونو10 وأعرب عن أن دراسة نمو الثقافات البكتيرية هي الطريقة الأساسية لعلم الأحياء المجهرية. تأخير ظهور الأدوات الجزيئية في الاستخدام ودراسة النمو كأسلوب. وعلى الرغم من الطابع المعقد للنمو الذي ينطوي على العديد من العمليات المترابطة، يمكن وصف آلياتها الأساسية.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Orbital Shaker | Thermo Scientific | 4353 | For inoculum incubation or conical fask cultures |
Bioscreen | Growth curves | C MBR | For batch cultures in microplates |
Glucose | Sigma | G7021 | For YPD broth preparation |
Peptone from casein, enzymatic digest | Sigma | 82303 | For YPD broth preparation |
Yeast extract | Sigma | 09182-1KG-F | For YPD broth preparation |
Bacteriological Agar | Sigma | A5306 | For YPD agar preparation |
NaH2PO4 | Sigma | S8282 | For SC broth preparation |
(NH4)2SO4 | Sigma | A4418 | For SC broth preparation |
Yeast nitrogen base without amino acids and ammonium sulfate | Sigma | Y1251 | For SC broth preparation |
Yeast synthetic drop-Out medium supplements | Sigma | Y1501 | For SC broth preparation |
Ammonium sulfate granular | J.T. Baker | 0792-R | For medium supplementation example |
Resveratrol | Sigma | R5010 | For medium supplementation example |
Galactose | Sigma | G8270 | For medium supplementation example |
Sucrose | Sigma | S7903 | For medium supplementation example |
Absolut ethanol | Merck | 107017 | For medium supplementation example |
Glycerol | J.T. Baker | 2136-01 | For medium supplementation example |
GraphPad Prism | GraphPad Software | For data analysis | |
Honeycomb microplates | Thermo Scientific | 9502550 | For microplate cultures |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved