Abstract
Bioengineering
Regulering av chromatin komprimering er en viktig prosess som styrer genuttrykk i høyere eukaryoter. Selv om chromatin komprimering og gene expression regulering er ofte forstyrret i mange sykdommer, har locus-spesifikke endogene og reversibel metode å studere og kontrollere disse virkningsmekanismer manglet. For å løse dette problemet, har vi utviklet og preget romanen gen-regulere bifunctional molekyler. Én komponent av bifunctional molekyl bindes til en DNA-protein anker slik at det vil bli rekruttert til en allel-bestemte locus. Den andre komponenten engasjerer endogene mobilnettet chromatin-modifisere maskiner, rekruttere disse proteinene til en genet av interesse. Disse små molekyler, som kalles kjemiske epigenetic modifikatorer (CEMs), er i stand til å kontrollere genuttrykk og chromatin miljø i en doseavhengig og reversibel måte. Her, detalj vi en CEM tilnærming og dens anvendelse å redusere genuttrykk og histone hale acetylation på grønn fluorescerende Protein (GFP) reporter på Oct4 locus i mus embryonale stamceller (mESCs). Vi karakteriserer ledelsen CEM (CEM23) med fluorescerende mikroskopi, flowcytometri og chromatin immunoprecipitation (ChIP), etterfulgt av en kvantitativ polymerasekjedereaksjons (qPCR). Mens kraften i dette systemet er demonstrert på Oct4 locus, konseptuelt, CEM teknologien er modulære og kan brukes i andre celletyper og andre genomisk loci.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved