Stive indlejring af faste og plettet, hele, Millimeter-skala prøver for sektion-gratis 3D histologi ved mikro-beregnet tomografi

For over hundrede år, har den histologiske undersøgelse af væv været guldstandarden for medicinsk diagnose fordi histologi giver alle celletyper i alle væv at være identificeret og karakteriseret. Vores laboratorium arbejder aktivt for at gøre teknologiske fremskridt i X-ray mikro-beregnet tomografi (mikro-CT), der vil bringe histologi diagnostiske magt til studiet af fuld væv diskenheder på cellulære opløsning (dvs., en X-ray Histo-Tomography modalitet). Mod denne ende, har vi gjort målrettede forbedringer til prøven forberedelse rørledning. En central optimering, og fokus for den nuværende arbejde, er en enkel metode til stive indlejring af faste og farves millimeter-skala prøver. Mange af de offentliggjorte metoder for eksempel immobilisering og korrelationsmaalinger mikro-CT billeddannelse stole på markedsføring prøverne i paraffinvoks, Agarosen eller væsker såsom alkohol. Vores tilgang udvider dette arbejde med brugerdefinerede procedurer og udformningen af en 3-dimensional printable apparat at integrere prøverne i en akryl harpiks direkte i polyimid slanger, som er relativt gennemsigtig til x-stråler. Prøven forberedelse procedurer er beskrevet for prøver fra 0,5 til 10 mm i diameter, som ville være velegnet til hele zebrafisk larver og ungfisk, eller andre dyr og vævsprøver af tilsvarende dimensioner. Som proof of concept, har vi indlejret prøver fra Danio, Drosophila, dafnierog en mus embryoner; repræsentative billeder fra 3-dimensionelle scanninger for tre af disse prøver er vist. Vigtigere, fører vores metodologi til flere fordele, herunder stive immobilisering, langsigtet bevaring af møjsommeligt lavet ressourcer og evnen til at re afhøre prøver.