Abstract
Bioengineering
Udviklingen af messenger RNA (mRNA)-baseret terapi til behandling af forskellige sygdomme bliver mere og mere vigtig på grund af positive egenskaber af in vitro transskriberet (IVT) mRNA. Ved hjælp af IVT mRNA, kan være fremkaldt de novo -syntesen af en ønskede protein uden ændring af målcellen fysiologiske tilstand. Derudover kan proteinsyntese styres netop på grund af forbigående effekten af IVT mRNA.
For den effektive Transfektion af celler, kan nanoliposomes (NLps) repræsenterer en sikker og effektiv levering køretøj for terapeutisk mRNA. Denne undersøgelse beskriver en protokol for at generere sikre og effektive kationiske NLps bestående af DC-kolesterol og 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE) som en levering vektor for IVT mRNA. NLps har en defineret størrelse, en homogen fordeling og en høj compleksering kapacitet og kan produceres ved hjælp af metoden tør-film. Desuden præsenterer vi forskellige testsystemer for at analysere deres kompleks og Transfektion efficacies ved hjælp af syntetiske forbedret grøn fluorescerende proteiner (eGFP) mRNA, samt deres effekt på cellernes levedygtighed. Samlet set giver præsenteres protokollen en effektiv og sikker tilgang til mRNA kompleks, som kan fremme og forbedre forvaltningen af terapeutiske mRNA.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved