המחברים תודה גרג לין, ארתור מק'קללנד על המומחיות שלהם עם מכונת מיקרו-CT, דיויד ריצ'מונד, צייד אליוט על התמונה ו- Core ניתוח נתונים (IDAC) בבית הספר לרפואה בהרווארד לעיבוד עצה תמונה שלהם, ויליאם ליברטי בבוסטון אוניברסיטת למתן באדיבות מוח זברה פינק. העבודה בוצעה באופן חלקי במרכז עבור ננו מערכות (CNS), חבר של נבחרת ננוטכנולוגיה מתואמת תשתית רשת (NNCI), אשר נתמך על ידי הקרן הלאומית למדע תחת ה-NSF פרס 1541959 מס. מערכת העצבים המרכזית היא חלק של אוניברסיטת הרווארד. עבודה זו נתמכה על ידי ריצ'ארד, קרן משפחת סמית סוזן IARPA (חוזה #D16PC00002). S.B.E.W. נתמך על ידי מלגות מתוך התוכנית המדע הגבול האנושי (HFSP; LT000514/2014), בארגון האירופי לביולוגיה מולקולרית (EMBO; ALTF1561-2013). מטרות נעלות נתמכה על ידי קרן המדע הלאומית (NSF) לתואר שני מחקר מלגת התוכנית (GRFP).

כל מניפולציה ניסויית של בעלי חיים והטיפול היו נבדקו ואושר על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים הרווארד ועל שימוש הוועדה. זלוף המתוארים כאן הוא ספציפי חולדות, אבל ההליך הוא החלים על בעלי חיים עם מוח קטן או בגודל דומה.
1. זלוף
<ol><li>להכין 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS). עבור מלשן (גיל: 0.5-1...

<ol>
	<li>Scoville, W., Milner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+recent+memory+after+bilateral+hippocampal+lesions.">Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions.</a> Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neuroscience. 12, 103-113 (2000).</li><li>Damasio, H., Grabowski, T., Frank, R., Galaburda, A. M., Damasio, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+return+of+Phineas+Gage:+clues+about+the+brain+from+the+skull+of+a+famous+patient.">The return of Phineas Gage: clues about the brain from the skull of a famous patient.</a> Science. 264 (5162), 1102-1105 (1994).</li><li>Kawai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+cortex+is+required+for+learning+but+not+for+executing+a+motor+skill.">Motor cortex is required for learning but not for executing a motor skill.</a> Neuron. 86, 800-812 (2015).</li><li>Otchy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+off-target+effects+of+neural+circuit+manipulations.">Acute off-target effects of neural circuit manipulations.</a> Nature. 528, 358-363 (2015).</li><li>Wright, N., Vann, S., Aggleton, J., Nelson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+the+anterior+thalamus+in+directing+attention+to+task-relevant+stimuli.">A critical role for the anterior thalamus in directing attention to task-relevant stimuli.</a> Journal of Neuroscience. 35, 5480-5488 (2015).</li><li>Kapgal, V., Prem, N., Hegde, P., Laxmi, T., Kutty, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+exposure+to+combination+paradigm+of+environmental+enrichment,+physical+exercise+and+diet+reverses+the+spatial+memory+deficits+and+restores+hippocampal+neurogenesis+in+ventral+subicular+lesioned+rats.">Long term exposure to combination paradigm of environmental enrichment, physical exercise and diet reverses the spatial memory deficits and restores hippocampal neurogenesis in ventral subicular lesioned rats.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 130, 61-70 (2016).</li><li>Hosseini, N., Alaei, H., Reisi, P., Radahmadi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+NBM-+lesion+on+synaptic+plasticity+in+rats.">The effects of NBM- lesion on synaptic plasticity in rats.</a> Brain Research. 1655, 122-127 (2017).</li><li>Palagina, G., Meyer, J., Smirnakis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+visual+motion+representation+in+mouse+area+V1.">Complex visual motion representation in mouse area V1.</a> Journal of Neuroscience. 37, 164-183 (2017).</li><li>Ranjbar, H., Radahmadi, M., Reisi, P., Alaei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+electrical+lesion+of+basolateral+amygdala+nucleus+on+rat+anxiety-like+behavior+under+acute,+sub-chronic,+and+chronic+stresses.">Effects of electrical lesion of basolateral amygdala nucleus on rat anxiety-like behavior under acute, sub-chronic, and chronic stresses.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. , (2017).</li><li>Wood, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+honeycomb+maze+provides+a+novel+test+to+study+hippocampal-dependent+spatial+navigation.">The honeycomb maze provides a novel test to study hippocampal-dependent spatial navigation.</a> Nature. , (2018).</li><li>Vermaercke, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+specialization+in+rat+occipital+and+temporal+visual+cortex.">Functional specialization in rat occipital and temporal visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 112, 1963-1983 (2014).</li><li>Jun, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+integrated+silicon+probes+for+high-density+recording+of+neural+activity.">Fully integrated silicon probes for high-density recording of neural activity.</a> Nature. 551, 232-236 (2017).</li><li>Mas&#237;s, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=micro-CT-based+method+for+quantitative+brain+lesion+characterization+and+electrode+localization.">micro-CT-based method for quantitative brain lesion characterization and electrode localization.</a> Scientific Reports. 8, 5184 (2018).</li><li>Gage, G., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. 65, 3564 (2012).</li><li>Helander, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+studies+of+formaldehyde+binding+in+tissue.">Kinetic studies of formaldehyde binding in tissue.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. , (1994).</li><li>Palj&#228;rvi, L., Garcia, J., Kalimo, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficiency+of+aldehyde+fixation+for+electron+microscopy:+stabilization+of+rat+brain+tissue+to+withstand+osmotic+stress.">The efficiency of aldehyde fixation for electron microscopy: stabilization of rat brain tissue to withstand osmotic stress.</a> Histochemical Journal. , (1979).</li><li>Okuda, K., Urabe, I., Yamada, Y., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+of+glutaraldehyde+with+amino+and+thiol+compounds.">Reaction of glutaraldehyde with amino and thiol compounds.</a> Journal of Fermentation and Bioengineering. 71, (1991).</li><li>Bahr, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmium+tetroxide+and+ruthenium+tetroxide+and+their+reactions+with+biologically+important+substances:+electron+stains+III.">Osmium tetroxide and ruthenium tetroxide and their reactions with biologically important substances: electron stains III.</a> Experimental Cell Research. , (1954).</li><li>Khan, A. A., Riemersma, J. C., Booij, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reactions+of+osmium+tetroxide+with+lipids+and+other+compounds.">The reactions of osmium tetroxide with lipids and other compounds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 9, 560-563 (1961).</li><li>Riemersma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmium+tetroxide+fixation+of+lipids+for+electron+microscopy+a+possible+reaction+mechanism.">Osmium tetroxide fixation of lipids for electron microscopy a possible reaction mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 152, (1968).</li><li>Mikula, S., Binding, J., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+and+embedding+the+whole+mouse+brain+for+electron+microscopy.">Staining and embedding the whole mouse brain for electron microscopy.</a> Nature Methods. 9, 1198-1201 (2012).</li><li>Mikula, S., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+whole-brain+staining+for+electron+microscopic+circuit+reconstruction.">High-resolution whole-brain staining for electron microscopic circuit reconstruction.</a> Nature Methods. 12, 541-546 (2015).</li><li>Crespigny, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+micro-CT+imaging+of+the+postmortem+brain.">3D micro-CT imaging of the postmortem brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 171, 207-213 (2008).</li><li>Anderson, R., Maga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+procedure+for+rapid+imaging+of+adult+mouse+brains+with+MicroCT+using+Iodine-Based+contrast.">A novel procedure for rapid imaging of adult mouse brains with MicroCT using Iodine-Based contrast.</a> PLoS One. 10, 0142974 (2015).</li><li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+cavernous+malformations+arise+from+endothelial+gain+of+MEKK3-KLF2/4+signalling.">Cerebral cavernous malformations arise from endothelial gain of MEKK3-KLF2/4 signalling.</a> Nature. 532, 122-126 (2016).</li><li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-CT+imaging+reveals+mekk3+heterozygosity+prevents+cerebral+cavernous+malformations+in+Ccm2-Deficient+mice.">Micro-CT imaging reveals mekk3 heterozygosity prevents cerebral cavernous malformations in Ccm2-Deficient mice.</a> PloS One. 11, 0160833 (2016).</li><li>Choi, J., Yang, X., Foley, M., Wang, X., Zheng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+Micro-CT+imaging+of+cerebral+cavernous+malformations+in+mouse+model.">Induction and Micro-CT imaging of cerebral cavernous malformations in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2017).</li><li>Benveniste, H., Kim, K., Zhang, L., Johnson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+microscopy+of+the+C57BL+mouse+brain.">Magnetic resonance microscopy of the C57BL mouse brain.</a> Neuroimage. 11, 601-611 (2000).</li><li>Weninger, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+episcopic+microscopy:+a+rapid+technique+for+high+detailed+3D+analysis+of+gene+activity+in+the+context+of+tissue+architecture+and+morphology.">High-resolution episcopic microscopy: a rapid technique for high detailed 3D analysis of gene activity in the context of tissue architecture and morphology.</a> Anat Embryol. 211, 213-221 (2006).</li><li>Schneider, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=high-throughput+magnetic+paragraph+sign+resonance+imaging+of+mouse+embryonic+paragraph+sign+anatomy+using+a+fast+gradient-echo+sequence.">high-throughput magnetic paragraph sign resonance imaging of mouse embryonic paragraph sign anatomy using a fast gradient-echo sequence.</a> MAGMA. 16, 43-51 (2003).</li><li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+projection+tomography.">Optical projection tomography.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 6, 209-228 (2004).</li><li>Cox, D. D., Papanastassiou, A., Oreper, D., Andken, B., James, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Resolution+Three-Dimensional+microelectrode+brain+mapping+using+stereo+microfocal+x-ray+imaging.">High-Resolution Three-Dimensional microelectrode brain mapping using stereo microfocal x-ray imaging.</a> Journal of Neurophysiology. 100, 2966-2976 (2008).</li><li>Borg, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+metal+electrodes+in+the+intact+rat+brain+using+registration+of+3D+microcomputed+tomography+images+to+a+magnetic+resonance+histology+atlas.">Localization of metal electrodes in the intact rat brain using registration of 3D microcomputed tomography images to a magnetic resonance histology atlas.</a> eNeuro. 2, (2015).</li><li>Fu, T. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+long-term+chronic+brain+mapping+at+the+single-neuron+level.">Stable long-term chronic brain mapping at the single-neuron level.</a> Nature Methods. 13, 875-882 (2016).</li></ol>

להלן השלבים הקריטיים לפרוטוקול: ראשית, השימוש בשילוב של כדורגלן GA perfuse החיה, לאחר מכן שלאחר ולתקן את המוח היה בעל חשיבות עליונה כדי להשיג חדירה עקבית אוסמיום מלא של הרקמה. למרות שאנחנו? לא לבדוק את זה במפורש, הסבר מתקבל על הדעת הוא כדורגלן קיבעון הוא הפיך15, ואילו קיבוע GA אינו הפי...

מדעני מוח צריכים לסמוך על נגעים במשך זמן רב כדי להבין את הקשר בין פונקציית המיקום במוח. לדוגמה, ההבנה שלנו של ההיפוקמפוס כמו להיות הכרחית למידה וזיכרון ואת קליפת המוח הקדם חזיתית בתור מפתח עבור שליטה בדחפים היו שני המוצרים של נגעים החרס בני אדם1,2. השימוש במודלים, עם זאת, אפשרה מדעני מוח כדי לרתום את העוצמה של נגעים על ידי מעבר סרנדיפיות, הפונקציה של אזורים במוח אינספור יש כבר הובהר באמצעות מחקרים שיטתיים של מבנה פונקציה קשרים באמצעות נגעים3,4.
להקצאת כראוי של הפונקציה למבנה, אולם, הנגע מחקרים דורשות כימות מדויק נהלים, אשר הוא אזור יש שהיה חסר. תקן הזהב הנוכחי עבור לכימות נגעים היא סעיף, הר, והמוח תמונה עם מיקרוסקופ אור. הפרוסות שבעורך ואז מתאימים לסעיפים הקרוב ב אטלס, נקודות הציון המשוער של נגעים על פני נושאים באופן עקיף מדווחים, לעיתים קרובות באמצעות מצלמה lucida תמונות או דוגמה היסטולוגית פרוסות3,4 ,5,6,7,8,9,10.
מעבר העוסקת מההליכים כימות הנגע הנוכחי, טכניקות אלה הן זמן רב מועדת לכישלון. שינויים קטנים בתוך המוח נוקשות, חדות הלהב וטמפרטורה יכול להוביל מקטעים הכושלת, מעוותת או קרועה. מקטעים באפשרותך גם כתם לצר, לדימות כראוי בגלל בועות המדיום הרכבה. חשוב, על חלוקתה, ההקשר תלת מימדי של המיקום של הנגע במוח הוא הפסיד, ביצוע שחזור תלת-ממד מדויקות של הנגע מאתגרת המוח.
יישום נפוץ אחר לחבלות היה לקבוע את המיקום של יחיד, הקלטות מרובות אלקטרודה במוח. בסוף להקלטות הסופי, חוקרים זירוז נגעים electrolytic קטן בקצה האלקטרודה ולעבד המוח בהיסטולוגיה כפי שנעשה ניסוי11של הנגע קונבנציונלי. טכניקה זו סובל החסרונות באותו שתוארה לעיל, עם בעיות נוספות בכך נגעים electrolytic בדרך כלל גדולים יותר האלקטרודות נהגה להכין אותם. אבל הם בדרך כלל קטנים מספיק כי הם הם מאתגרים למצוא בהיסטולוגיה. כאשר מספר אלקטרודות מוכנסים, כמו במקרה של מערך tetrode, אימות דרך נגעים electrolytic הוא יותר מאתגר. אלטרנטיבה נגעים electrolytic הוא השימוש של צבע על האלקטרודה כדי מאוחר יותר לאמת בהיסטולוגיה12, אך טכניקה זו סובלת החסרונות אותו עם היסטולוגיה קונבנציונלי.
כאן, אנו מתארים מעמיק שיטת תיאר לאחרונה13 בהתבסס על צביעת טכניקות מיקרוסקופ אלקטרונים (EM) ו רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת (מיקרו-CT) מכמתת נגעים, מאתרת אלקטרודות במוח בעל חיים קטן יותר הנוכחי שיטות. מיקרו-CT היא טכניקת הדמיה שבו צילומי רנטגן הם ירו מדגם מסובבת 360° בזמן scintillator אוספת את צילומי הרנטגן לא מוסח על ידי המדגם. התוצאה היא שחזור תלת-ממד דיגיטלית ברזולוציה גבוהה של המדגם שניתן דמיינו בכיוון כלשהו או לכמת במדויק. מוסדות אקדמיים רבים יש מיקרו-CT סורקים, אשר הינם גם זמינים מסחרית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1016px;" width="1016">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:288px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:217px;">Electron Microscopy Sciences (EMS)</td>
			<td align="right" style="width:344px;">15710</td>
			<td style="width:167px;">2% (w/v/) in 1X PBS</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glutaraldehyde (GA)</td>
			<td>EMS</td>
			<td align="right">16220</td>
			<td>2.5% (w/v) GA in 1X PBS</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">OsO4</td>
			<td>EMS</td>
			<td align="right">19190</td>
			<td>Work in fume hood</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>140, 190, 200 proof</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Acetone</td>
			<td>EMS</td>
			<td align="right">10015</td>
			<td>Glass-distilled</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Durcupan ACM resin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">44610</td>
			<td>A, B, C and D components, resin for embedding</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable molds</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td align="right">27114</td>
			<td>Suggested</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">milliQ water (ultrapure water)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>QGARD00R1 (or related purifier)</td>
			<td>Suggested</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Parafilm (paraffin film)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P7793</td>
			<td>Suggested paraffin film</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Micro-CT scanner</td>
			<td>Nikon Metrology Ltd., Tring, UK</td>
			<td>X-Tek HMS ST 225</td>
			<td>Used by authors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Software for visualizing and analyzing micro-CT scans:</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>Volume Graphics</td>
			<td>VG Studio Max</td>
			<td>Used by authors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>FEI / Thermo Scientific</td>
			<td>Avizo</td>
			<td>Used by authors</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>FEI / Thermo Scientific</td>
			<td>Amira</td>
			<td>Similar to Avizo</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>Mark Sutton &#38; Russell Garwood</td>
			<td>Spiers</td>
			<td>Free, http://spiers-software.org/</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>Pixmeo Sarl</td>
			<td>Osirix Lite</td>
			<td>Free, https://www.osirix-viewer.com/</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>Open Source</td>
			<td>FIJI</td>
			<td>Free, https://fiji.sc/</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td>Adobe</td>
			<td>Photoshop</td>
			<td>Good for analyzing one slice at a time</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a micro-ct-based method for characterizing lesions and locating electrodes in small animal brains

אימות מיקום הנגע, אלקטרודה נעשים באופן מסורתי באמצעות היסטולוגית בחינת פרוסות המוח מוכתם, הליך גוזלת זמן זה דורש הערכה ידנית. כאן, אנו מתארים שיטה פשוט, פשוט לכימות נגעים ואיתור אלקטרודות במוח פחות מייגעת, מניבה תוצאות מפורטות יותר. כל המוח הן מוכתמות אוסמיום ארבע-חמצני, המוטבעות שרף, עם תמונה עם סורק מיקרו-CT. הסריקות לגרום בכמויות דיגיטלית תלת-ממד של המוח עם רזולוציות, סעיף וירטואלי עוביים תלויים גודל המדגם (מיקרומטר 12-15 ו- 5 – 6 לכל voxel עכברוש, זברה פינק המוח, בהתאמה). נגעים משטח עמוק ניתן לאפיין, יחיד tetrodes, tetrode מערכים, נגעים electrolytic ואני גם יכול להיות מקומי סיליקון הגששים. תוכנה חופשית, הקניינית מאפשרת ניסויים לבחון האחסון מדגם של כל מטוס, קטע עוצמת הקול באופן ידני או אוטומטי. כי שיטה זו יוצרת נפח כל המוח, נגעים ואלקטרודות ניתן לכמת את רמה גבוהה יותר מאשר בשיטות הנוכחי, אשר יסייע לתקנן השוואות בתוך ועל -פני לימודי.

באופן מסורתי, המוח למחלקה, צבעונית על מנת לכמת נגעים ולאתר אלקטרודות, אך שיטה זו מועדת לשגיאות שדורשת, בדרך כלל דורש הערכה של התוצאות. על-ידי הכנת כל המוח עבור מיקרו-CT הדמיה, הקטינה באופן משמעותי ההסתברות של פגיעה הדגימות, תכונות של הריבית עשויה להיות מנותח בהקשר של המוח כו...

Watch this Scientific Journal Video about A Micro-CT-based Method for Characterizing Lesions and Locating Electrodes in Small Animal Brains at JoVE.com

A Micro-CT-based Method for Characterizing Lesions and Locating Electrodes in Small Animal Brains

שיטה המבוססות על מיקרו-CT אפיון נגעים ואיתור אלקטרודות במוח בעלי חיים קטנים

מאמר זה מתאר שיטה פשוטה כדי להתכונן מוח בעל חיים קטן מיקרו-CT הדמיה, פצעים אשר ניתן לכמת, אלקטרודות הממוקם עם דיוק גבוהה בהקשר של המוח כולו.

Lesion and electrode location verification are traditionally done via histological examination of stained brain slices, a time-consuming procedure that ...

שיטה זו יכולה לסייע לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח על ידי מתן שיטה פשוטה יותר, פחות נוטה לשגיאות, ושיטה כמותית יותר לאימות נגעים ואיתור מיקומי אלקטרודה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת אימות של נגעים ואתרי אלקטרודה במוח כולו ללא צורך בניתוח. המוצר הסופי הוא נפח תלת-מימדי דיגיטלי של המוח ומוחות מרובים יכולים להיות מעובדים במקביל.למרות שיטה זו יוכח בחולדה, זה יכול להיות מיושם גם על אורגניזמים אחרים, כגון עכברים פרושים זברה. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו כי כמה צעדים דורשים טיפול מסוים כדי להבטיח את התוצאות הטובות ביותר. כדי להתחיל, למקם מוח שחולץ בתת פתרון שפע בצינור חרוט 50 מיליליטר.אחסן את הדגימה במשך יומיים עד שלושה עם רעידות עדינות בארבע מעלות צלזיוס. ודא כי אוסמיניום מדולל במים ולא חיץ. הסיבה לכך היא כי המים יפעלו כמו דטרגנט מתון, המאפשר אוסמיניום לחדור עמוק לתוך הרקמה.הכינו 50 מיליליטר של 2% אוסיום טטרוקסיד במים מזוקקים כפולים. ואז למקם את המוח בצינור חרוט חדש 50 מיליליטר ולהוסיף את פתרון אוסיום tetroxide. סגור את הצינור ואתום אותו עם סרט פרפין כדי למנוע דליפות.אחסן את הצינור האטום בארבע מעלות צלזיוס עם רעידות עדינות במשך שבועיים. ודא כי הצינור ממוקם אופקית. המוח עבה מאוד ודרכים ארוכות לנסוע על ידי דיפוזיה.הצבת הצינור אופקית תאפשר לאוסמיניום לנוע עמוק יותר לתוך הרקמה. לאחר הדגירה מדגם במשך שבועיים, לשטוף אותו עם מים מזוקקים פעמיים חמש פעמים כדי להסיר את כל osmium tetroxide מאוגד מהדגימה. לאחר מכן, לשטוף את המדגם עם מים מזוקקים כפול במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס.החלף את המים מזוקקים כפול עם ארבעה דילול של אתנול כדי לייבש את המדגם. כדי להתחיל את תהליך חדירת שף, להעביר את המדגם דרך שלושה אצטון ושלושה דילולים אצטון שף, ולאחר מכן לטבול את המדגם ב 100% שף בטמפרטורת החדר כדי להמשיך את תהליך החדירה. לאחר מכן, להעביר את הדגימה לתבנית חד פעמית.להחדיר את המדגם עם טרי 100% שדון במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר. דגה את הדגימה בתנור ואקום במשך 15 דקות ב 45 מעלות צלזיוס. ואז לרפא את הדגימה בתנור במשך 48 שעות ב 60 מעלות צלזיוס.לבסוף, כאשר המדגם סיים לרפא, לקלף את התבנית החד פעמית ולסרוק אותו עם מכונת מיקרו CT. בניתוח מסורתי, יש לציין מראש את כיוון המוח. באמצעות שיטת מיקרו-CT זו, ניתן לתפעל את הנפח הדיגיטלי של המוח המדגם בשלושה ממדים ולמעשה לחתוך אותו לכל כיוון.סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים של מוח החולדה המוכן מאשרת כי הרקמה לא נפגעה באופן משמעותי לצורך הדמיית מיקרו-CT. מוח פרוש זברה היה גם מוכן נסרק על פי פרוטוקול זה כדי לבדוק את התועלת של שיטה זו על מוחות בעלי חיים קטנים אחרים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי למצוא נגעים פני השטח במוח, כמו גם נגעים עמוק בתוך המוח.טכניקה זו יכולה להיות מיושמת גם על המיקום של טטרודים בודדים במקום, נגעים אלקטרוליטיים, מסלולי אלקטרודה, מערכי טטרודה במקום, ובדיקות סיליקון במקום. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לאפשר למוח דגירה מספיק זמן עם מספיק תסיסה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אופטוגנטיקה והדמיה של שני פוטון על מנת לענות על שאלות נוספות על התפקיד של אזורי מוח שונים בהתנהגויות שונות.טכניקה זו יכולה לאפשר לחוקרים בתחום מדעי המוח לחקור טוב יותר את יחסי המבנה-תפקוד בין המוח להתנהגות בחולדות, עכברים, ציפורי שיר ובעלי חיים קטנים אחרים. אל תשכח כי עבודה עם אוסמיניום יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות, כגון ללבוש כפפות ולעבוד במכסה המנוע ואקום תמיד צריך לקחת בעת ביצוע הליך זה.