多夏巴氏杆菌自主表达采用除抑制技术

甲醇是一种成熟的碳源, 是利用毕赤酵母(p. pastoris) 作为微、实验室和工业规模的宿主的高效蛋白质生产的诱导剂。然而, 由于甲醇的毒性和易燃性, 人们希望在保持高生产率的同时避免甲醇的生产。小型生物反应器的栽培 (0.5-5l 工作体积) 通常用于评价菌株及其蛋白质生产特性, 因为深井板的微规模栽培很难控制或依赖昂贵的设备。此外, 还建立了传统的牧草培养和诱导方案, 用于本构表达或甲醇诱导, 目前还没有描述出筛选牧草表达的可靠协议。在平行栽培中具有无可抑制启动子的菌株。为了简化这种初始培养, 以表征和比较新的蛋白质生产菌株, 我们建立了一个简单的奶瓶培养系统, 用于甲醇自由表达, 模拟生物反应器条件, 包括持续缓慢的甘油饲料与在线监测相比, 生物反应器的实际情况更接近于小批量生产。为促进巴氏重组蛋白的表达, 采用碳源抑制启动子_{p dc} 和p_df 。嵌入碳源的聚合物圆盘, 释放出恒定数量的甘油, 保证了饲料速率, 为保持启动子的活性提供了必要的能量, 同时保持了生物量的低产生。