Methanol unabhängigen Ausdruck von Pichia Pastoris de-Unterdrückung Technologien

Methanol ist ein gut etabliertes Kohlenstoffquelle und Induktor für effiziente Proteinproduktion Pichia Pastoris (p. Pastoris) als Gastgeber auf Mikro-, Labor und Industrie beschäftigt. Aufgrund seiner Toxizität und Entflammbarkeit ist jedoch ein Wunsch, Methanol unter Beibehaltung der hohen Produktivität der p. Pastoriszu vermeiden. Kleinen Maßstab Bioreaktor Bebauungen (0,5-5 L Arbeitsvolumen) werden häufig verwendet, um eine Belastung und seine Protein Produktionsmerkmale zu bewerten, da Microscale Anbau in Tiefbrunnen Platten kaum gesteuert werden oder stützt sich auf teure Ausrüstung. Darüber hinaus wurden traditionelle Protokolle für den Anbau und die Induktion von p. Pastoris für konstitutive Expression oder Methanol Induktion bisher gegründet und keine zuverlässige Protokolle zum Bildschirm p. Pastoris Ausdruck beschrieben wurden Stämme mit derepressible Promotoren in (kontrollierte und überwachte) parallele Kulturen. Um diese ersten Bebauungen zu charakterisieren und vergleichen neue Protein Produktionsstämme zu vereinfachen, haben wir ein einfaches Schütteln Kolben Anbausystem für Methanol freie Meinungsäußerung, die Bioreaktor-Bedingungen, einschließlich eine ständige langsame Glycerin feed simuliert und Online-Überwachung, damit Annäherung an die realen Bedingungen in Bioreaktoren im Vergleich zu den meist angewandten kleinen Batch Bebauungen. Rekombinante Proteinexpression in p. Pastoris die Kohlenstoffquelle Antrieb unterdrückt Promotoren P_DC und P_DF angewendet wurden. Polymer-discs mit eingebetteten Kohlenstoffquelle Freigabe eine konstante Menge von Glycerin, versichert eine Vorschubgeschwindigkeit liefert die notwendige Energie für die Aufrechterhaltung der Promotoren aktiv während die Biomasse-Generation gering zu halten.