Metanolo espressione indipendente di Pichia Pastoris che impiegano tecnologie di-repressione

Il metanolo è una fonte di carbonio ben consolidata e induttore per la produzione di proteina efficiente impiegando Pichia pastoris (p. pastoris) come un host su scala micro-, laboratorio e industriale. Tuttavia, a causa della sua tossicità e infiammabilità, c'è un desiderio di evitare metanolo pur mantenendo l'elevata produttività di p. pastoris. Coltivazioni di bioreattore a piccola scala (0,5-5 volume di lavoro L) sono comunemente utilizzati per valutare un ceppo e le sue caratteristiche di produzione di proteine poiché Microscala coltivazione nel pozzi profondo piastre sono difficilmente controllabili o si basa su attrezzature costose. Inoltre, tradizionali protocolli per la coltivazione e l'induzione di p. pastoris sono stati stabiliti per induzione costitutiva di espressione o metanolo e finora, che nessun protocolli affidabili sono stati descritti all'espressione di p. pastoris schermo ceppi con derepressible promotori in colture parallele (controllati e monitorati). Per semplificare tali coltivazioni iniziale per caratterizzare e confrontare nuovi ceppi di produzione di proteina, abbiamo istituito un sistema di coltivazione di boccetta semplice shake per la libera espressione di metanolo che simula condizioni di bioreattore compreso un glicerolo lento costante feed e monitoraggio on-line, quindi si avvicina alle condizioni reali in bioreattori rispetto alle coltivazioni di batch principalmente applicata su piccola scala. Per guidare l'espressione della proteina ricombinante in p. pastoris, fonte di carbonio represso promotori P_DC e P_DF sono stati applicati. Polimero dischi con fonte di carbonio incorporato, rilasciando una quantità costante di glicerolo, ha assicurato una velocità di avanzamento fornire l'energia necessaria per mantenere attivi i promotori, mantenendo bassa la produzione di biomassa.