Expresión independiente de metanol por Pichia Pastoris empleando tecnologías de la represión

El metanol es una fuente de carbono bien establecida y un inductor para la producción de proteína eficiente empleo de Pichia pastoris (p. pastoris) como un host en escala micro, laboratorio e industrial. Sin embargo, debido a su toxicidad e inflamabilidad, es un deseo de evitar el metanol manteniendo la alta productividad de p. pastoris. Cultivos de pequeña escala del biorreactor (0.5-5 volumen de trabajo de L) se utilizan comúnmente para evaluar una cepa y sus características de producción de proteína ya que cultivo de microescala en placas de pozos profundos puede controlarse apenas o se basa en equipos costosos. Además, protocolos tradicionales para el cultivo y la inducción de p. pastoris se establecieron para la inducción de expresión o metanol constitutiva y hasta ahora, no hay protocolos confiables fueron descritos a la expresión de p. pastoris de pantalla cepas con derepressible promotores de cultivos paralelos (controladas y supervisadas). Para simplificar tales cultivos iniciales para caracterizar y comparar nuevas cepas de producción de la proteína, establecimos un sistema de cultivo simple agitar frasco para la libre expresión de metanol que simula condiciones de biorreactor incluyendo un glicerol lento constante alimentación y monitoreo en línea, lo más cercano a las condiciones reales en biorreactores comparados sobre todo cultivos de lote aplicado a pequeña escala. La fuente de carbono para expresión de proteínas recombinantes en p. pastoris, reprimido promotores se aplicaron P_DC y P_DF . Discos de polímero con fuente de carbono integrado, liberando una cantidad constante de glicerol, asegurada una tasa de alimentación entrega la energía necesaria para mantener los promotores activos, manteniendo baja la generación de biomasa.