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Cancer Research

Évaluation du risque et de la prévalence du cancer colorectal par détection de l’intégrité de l’ADN des selles

Published: June 8th, 2020

DOI:

10.3791/59426

1Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, Meldola, Italy, 2Diatech Pharmacogenetics srl

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Le kit de DIAGNOSTIC PRÉSENTÉ FL-ADN est une méthode de gain de temps et conviviale pour déterminer la probabilité fiable de la présence de lésions de cancer colorectal.

De nos jours, l’ADN des selles peut être isolé et analysé par plusieurs méthodes. Les longs fragments d’ADN dans les selles peuvent être détectés par un essai qPCR, qui fournit une probabilité fiable de la présence de lésions côlorectiques pré-néoplastiques ou néoplastiques. Cette méthode, appelée fluorescence long DNA (FL-ADN), est une procédure rapide et non invasive qui est une amélioration par rapport au système de prévention primaire. Cette méthode est basée sur l’évaluation de l’intégrité de l’ADN fécal par amplification quantitative de cibles spécifiques de l’ADN génomique. En particulier, l’évaluation des fragments d’ADN de plus de 200 bp permet de détecter les patients atteints de lésions côlorectaux avec une spécificité très élevée. Cependant, ce système et tous les tests d’ADN des selles actuellement disponibles présentent des problèmes généraux qui doivent être abordés (p. ex., la fréquence à laquelle les tests devraient être effectués et le nombre optimal d’échantillons de selles prélevés à chaque point de vue pour chaque individu). Cependant, le principal avantage de l’ADN FL est la possibilité de l’utiliser en association avec un test actuellement utilisé dans le programme de dépistage du CRC, connu sous le nom de test sanguin occulte fécical à base d’immunochimie (iFOBT). En effet, les deux tests peuvent être effectués sur le même échantillon, réduisant les coûts et réalisant une meilleure prévision de la présence éventuelle de lésions côlorectaux.

Le cancer colorectal (CRC) provient d’un processus en plusieurs étapes dans lequel l’épithélium sain se développe lentement en adéomes ou polypes, qui progressent dans les carcinomes malins au fil du temps1,2. Malgré le taux d’incidence élevé du CRC, on a observé une tendance à la baisse du pourcentage de décès au cours de la dernière décennie3. En effet, les premiers outils de diagnostic adoptés dans les programmes de dépistage ont conduit à la détection et à l’élimination précoces des adéomes pré-néoplastiques ou des polypes4. Cependant, en raison des différent....

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Des patients ont été recrutés à l’Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) de Meldola (FC, Italie) entre 2013 et 2015. Les patients inscrits étaient dans le protocole IRSTB002, approuvé par le Comité d’éthique de l’IRST - IRCCS AVR (25/10/2012, ver. 1). Toutes les méthodes ont été exécutées conformément aux lignes directrices et règlements pertinents. Le consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les patients.

1. Extraction d’ADN ?.......

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Le flux de travail de ce protocole est indiqué dans la figure 1. Le flux de travail fournit deux étapes de contrôle et des actions différentes selon ces résultats d’étape. Tout d’abord, si un échantillon présente des contrôles inappropriés, l’amplification doit être répétée. Deuxièmement, si l’amplification est inhibée, l’échantillon doit être retraité dès le début ou classé comme n’étant pas utile.

La figure 2 montre les cou.......

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Des études antérieures ont démontré que l’analyse de l’intégrité de l’ADN des selles extraites par des approches manuelles et semi-automatiques peut représenter un outil alternatif pour la détection précoce des lésions colorectales7,8,9,10,11,12. Des tests de dépistage moléculaires et non invasifs ont été .......

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Les auteurs n’ont aucune reconnaissance.

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NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL and 2 mL polypropylene twist-lock tubes (DNase-, RNase-, DNA-, PCR inhibitor-free)Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Absolute Ethanol (quality of analytical degree)Reagent required for DNA extraction
Benchtop centrifuge Maximum speed of 20000 x g. Instrument required for DNA extraction
EasyPGX analysis software version 2.0.0Diatech PharmacogeneticsRT800-SWAnalysis software 
EasyPGX centrifuge/vortex 8-well stripsDiatech PharmacogeneticsRT803Instrument recommended for the Real Time PCR assay
EasyPGX qPCR instrument 96 Diatech PharmacogeneticsRT800-96Instrument recommended for the Real Time PCR assay
EasyPGX ready FL-DNADiatech PharmacogeneticsRT029Kit required for the Real Time PCR assay
Micropipettes (volumes from 1 to 1.000 µL)Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Powder-free disposable glovesConsumables required for DNA extraction and Real Time PCR
QIAamp Fast DNA StoolQiagen51604Kit recommended for the DNA extraction and purification from stool
Sterile filter tips DNase-, RNase-free (volumes from 1 to 1.000 µL)Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Thermal block e.g. EasyPGX dry blockDiatech PharmacogeneticsRT801Instrument required for DNA extraction
Vortex e.g. EasyPGX centrifuge/vortex 1.5 ml Diatech PharmacogeneticsRT802Instrument required for DNA extraction

  1. Fearon, E. R. Molecular Genetics of Colorectal Cancer. Annual Review of Pathology. 6, 479-507 (2011).
  2. Sears, C. L., Garrett, W. S. Microbes, Microbiota, and Colon Cancer. Cell Host and Microbe. 15, 317-328 (2014).
  3. Levin, B., et al. Screening and Surveillance for the Early Detection of Colorectal Cancer and Adenomatous Polyps, 2008: A Joint Guideline From the American Cancer Society, the US Multi-Society Task Force on Colorectal Cancer, and the American College of Radiology. Gastroenterology. 134, 1570-1595 (2008).
  4. Bosch, L. J., et al. Molecular tests for colorectal cancer screening. Clinical Colorectal Cancer. 10, 8-23 (2011).
  5. Ahlquist, D. A. Molecular detection of colorectal neoplasia. Gastroenterology. 138, 2127-2139 (2010).
  6. Calistri, D., et al. Fecal multiple molecular tests to detect colorectal cancer in stool. Clinical Gastroenterology and Hepatology. 1, 377-383 (2003).
  7. Calistri, D., et al. Detection of colorectal cancer by a quantitative fluorescence determination of DNA amplification in stool. Neoplasia. 6, 536-540 (2004).
  8. Calistri, D., et al. Quantitative fluorescence determination of long-fragment DNA in stool as a marker for the early detection of colorectal cancer. Cellular Oncology. 31, 11-17 (2009).
  9. Calistri, D., et al. Fecal DNA for noninvasive diagnosis of colorectal cancer in immunochemical fecal occult blood test-positive individuals. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention. 19, 2647-2654 (2010).
  10. De Maio, G., et al. Circulating and stool nucleic acid analysis for colorectal cancer diagnosis. World Journal of Gastroenterology. 20, 957-967 (2014).
  11. Rengucci, C., et al. Improved stool DNA integrity method for early colorectal cancer diagnosis. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention. 23, 2553-2560 (2014).

Erratum

Erratum: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection

An erratum was issued for: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection. An affiliation was updated.

The first affiliation was updated from:

Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST)

to:

Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, Meldola, Italy

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