Evaluering av kolorektal kreftrisiko og prevalens ved deteksjon av avføring DNA-integritet

Det presenterte diagnostiske FL-DNA-settet er en tidsbesparende og brukervennlig metode for å fastslå den pålitelige sannsynligheten for tilstedeværelse av kolorektal kreftlesjoner.

I dag kan avføring DNA isoleres og analyseres ved hjelp av flere metoder. De lange fragmentene av DNA i avføring kan oppdages av en qPCR-analyse, noe som gir en pålitelig sannsynlighet for tilstedeværelsen av pre-neoplastiske eller neoplastiske kolorektale lesjoner. Denne metoden, kalt fluorescens lang DNA (FL-DNA), er en rask, ikke-invasiv prosedyre som er en forbedring på det primære forebyggende systemet. Denne metoden er basert på evaluering av fekal DNA-integritet ved kvantitativ forsterkning av spesifikke mål for genomisk DNA. Spesielt gjør evalueringen av DNA-fragmenter lenger enn 200 bp det mulig å påvise pasienter med kolorektal lesjoner med svært høy spesifisitet. Imidlertid presenterer dette systemet og alle tilgjengelige avføring DNA-tester noen generelle problemer som må løses (f.eks. hvor ofte tester skal utføres og optimalt antall avføringsprøver samlet inn på hvert tidspunkt for hver enkelt). Den største fordelen med FL-DNA er imidlertid muligheten til å bruke den i forbindelse med en test som for tiden brukes i CRC-screeningprogrammet, kjent som immunkjemisk basert fekal okkult blodprøve (iFOBT). Faktisk kan begge testene utføres på samme prøve, redusere kostnader og oppnå en bedre prediksjon av den endelige tilstedeværelsen av kolorektal lesjoner.

Kolorektal kreft (CRC) stammer fra en flertrinnsprosess der sunt epitel sakte utvikler seg til adenomer eller polypper, som utvikler seg til ondartede karsinomer over tid^1,,2. Til tross for CRCs høye forekomstrate, har en nedadgående trend i andelen dødsfall blitt observert i løpet av det siste tiåret³. Faktisk har tidlige diagnostiske verktøy vedtatt i screeningprogrammer ført til tidlig deteksjon og fjerning av pre-neoplastiske adenomer eller polypper⁴. Men på grunn av de forskjellige tekniske grensene, er ingen av disse metodene optimale. Faktisk, for å forbed....

Pasientene ble rekruttert ved Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) i Meldola (FC, Italia) mellom 2013 og 2015. Innmeldte pasienter var i protokoll IRSTB002, godkjent av Etikkkomiteen i IRST - IRCCS AVR (25/10/2012, ver. 1). Alle metoder ble utført i samsvar med relevante retningslinjer og forskrifter. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter.

1. DNA-ekstraksjon fra avføring

1. Bruk et sett til å klargjøre avføringsprøver (se.......

Arbeidsflyten for denne protokollen vises i figur 1. Arbeidsflyten inneholder to kontrolltrinn og forskjellige handlinger i henhold til disse trinnresultatene. For det første, hvis en prøve presenterer uegnede kontroller, må forsterkningen gjentas. For det andre, hvis forsterkningen er hemmet, må prøven reprosesseres fra begynnelsen eller klassifisert som ikke verdifull.

Figur 2 viser fluorescenskurvene som produseres av positive og negative prøver. (

Tidligere studier har vist at DNA integritet analyse av avføring ekstrahert av manuelle og halvautomatiske tilnærminger kan representere et alternativt verktøy for tidlig påvisning av kolorektal lesjoner^{7,8,9,10,11,12}. Molekylære, ikke-invasive screeningtester har blitt utviklet gjennom årene for påvisning av kolorekta.......

Forfatterne har ingen anerkjennelser.