Utvärdering av kolorektal cancer risk och prevalens av avföring DNA Integrity Detection

Den presenterade diagnostiska FL-DNA kit är en tidsbesparande och användarvänlig metod för att bestämma den tillförlitliga sannolikheten för förekomsten av kolorektal cancer skador.

Numera kan avförings-DNA isoleras och analyseras med flera metoder. De långa fragmenten av DNA i avföringen kan detekteras genom en qPCR-analys, vilket ger en tillförlitlig sannolikhet för närvaron av pre-neoplastiska eller neoplastiska kolorektal lesioner. Denna metod, som kallas fluorescens lång DNA (FL-DNA), är en snabb, icke-invasiv förfarande som är en förbättring av det primära förebyggande systemet. Denna metod bygger på utvärdering av fekal DNA-integritet genom kvantitativ förstärkning av specifika mål för genomiskt DNA. I synnerhet gör utvärderingen av DNA-fragment längre än 200 bp för detektering av patienter med kolorektal skador med mycket hög specificitet. Detta system och alla tillgängliga avförings-DNA-tester uppvisar dock några allmänna frågor som måste åtgärdas (t.ex. hur ofta tester bör utföras och optimalt antal avföringsprover som samlas in vid varje tidpunkt för varje individ). Den största fördelen med FL-DNA är dock möjligheten att använda det i samband med ett test som för närvarande används i CRC screening program, känd som immunokemiska-baserade fekal ockulta blodprov (iFOBT). Faktum är att båda testerna kan utföras på samma prov, minska kostnaderna och uppnå en bättre förutsägelse av den eventuella förekomsten av kolorektal skador.

Kolorektal cancer (CRC) härrör från en flerstegsprocess där friska epitel långsamt utvecklas till adenom eller polyper, som utvecklas till maligna carcinom över tiden^1,2. Trots CRC: s höga incidens, en nedåtgående trend i andelen dödsfall har observerats under det senaste decenniet³. Faktum är att tidiga diagnostiska verktyg som antagits i screening program har lett till tidig upptäckt och avlägsnande av pre-neoplastiska adenom eller polyper⁴. På grund av de olika tekniska gränserna är dock ingen av dessa metoder optimal. För att förbättra känsligheten och specif....

Patienterna rekryterades till Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) i Meldola (FC, Italien) mellan 2013 och 2015. Inskrivna patienter var i protokoll IRSTB002, godkänd av etikkommittén för IRST - IRCCS AVR (25/10/2012, ver. 1). Alla metoder har utförts i enlighet med relevanta riktlinjer och föreskrifter. Skriftligt informerat samtycke erhölls från alla patienter.

1. DNA-extraktion från avföring

1. Använd ett kit för att förbereda avföring.......

Arbetsflödet för detta protokoll visas i figur 1. Arbetsflödet innehåller två kontrollsteg och olika åtgärder enligt dessa stegresultat. Om ett prov visar olämpliga kontroller måste förstärkningen upprepas. För det andra, om förstärkningen hämmas, måste provet upparbetas från början eller klassificeras som inte värdefullt.

Figur 2 visar fluorescenskurvorna som produceras av positiva och negativa prover. (A) Visas är ett exe.......

Tidigare studier har visat att DNA-integritetsanalys av avföring som extraherats genom manuella och halvautomatiska metoder kan utgöra ett alternativt verktyg för tidig upptäckt av kolorektal lesioner^{7,,8,,9,10,11,12}. Molekylära, noninvasive screening tester har utvecklats under åren för att upptäcka kolorektal cancer.......

Författarna har inga erkännanden.