Abstract
Biochemistry
الكروماتوغرافيا التحليلية للاستبعاد من الحجم (SEC)، التي يشيع استخدامها لتحديد الوزن الجزيئي للبروتينات ومجمعات البروتين البروتين في الحل، هو تقنية نسبية تعتمد على حجم الانتقاص من التحليلات لتقدير الجزيئات الوزن. عندما لا يكون البروتين كروياً أو يخضع لتفاعلات عمود غير مثالية، يكون منحنى المعايرة المستند إلى معايير البروتين غير صحيح، والوزن الجزيئي المحدد من حجم الإلوتين غير صحيح. تشتت الضوء متعدد الزوايا (MALS) هو تقنية مطلقة تحدد الوزن الجزيئي للحقن في الحل من المعادلات المادية الأساسية. يشكل الجمع بين لجنة الأوراق المالية والبورصة للانفصال مع MALS للتحليل وسيلة متعددة الاستخدامات وموثوق بها لتوصيف حلول نوع واحد أو أكثر من أنواع البروتين بما في ذلك مونومرات، أو oligomers الأصلية أو المجاميع، وcomplexes غير متجانسة. وبما أن القياس يتم في كل حجم من وحدات الإنتاج، يمكن أن تحدد لجنة الأوراق المالية والبورصة -MALS ما إذا كانت ذروة الإلاتينغ متجانسة أو غير متجانسة وتميز بين توزيع الوزن الجزيئي الثابت مقابل التوازن الديناميكي. تحليل البروتينات المعدلة مثل البروتينات السكرية أو البروتينات الدهنية، أو المتشابهة مثل البروتينات الغشاء المنظفات القابلة للذوبان، من الممكن أيضا. وبالتالي، SEC-MALS هو أداة حاسمة للكيميائي البروتين الذي يجب أن تؤكد الخصائص الفيزيائية الحيوية وسلوك الحل للجزيئات المنتجة للبحوث البيولوجية أو التكنولوجية الحيوية. هذا البروتوكول لSEC-MALS يحلل الوزن الجزيئي وحجم مونومرات البروتين النقي والمجاميع. وتشكل البيانات التي تم الحصول عليها أساسا ً لمزيد من التحليلات التي تجريها لجنة الأوراق المالية والبورصة، بما في ذلك تحليلات المجمعات والبروتينات السكرية والبروتينات الغشائية المربوطة بالسطحي.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved