蛋白质的表征(按尺寸-排除色谱与多角度光散射相结合(SEC-MALS)

分析尺寸排除色谱(SEC),通常用于测定溶液中蛋白质和蛋白质-蛋白质复合物的分子量,是一种相对技术,它依靠分析物的洗脱体积来估计分子重量。当蛋白质不是球状或经历非理想柱相互作用时,基于蛋白质标准的校准曲线无效,从洗脱量中确定的分子量不正确。多角度光散射(MALS)是一种绝对技术,它根据基本物理方程确定溶液中分析物的分子量。SEC 分离与 MALS 分析相结合,构成了一种多功能、可靠的方法,用于描述一种或多种蛋白质物种(包括单体、原生寡聚物或聚合体和异质复合物)的溶液特征化。由于测量在每个洗脱体积上进行,SEC-MALS 可以确定脱模峰是均匀的还是异质的,并区分固定的分子量分布与动态平衡。也可以分析修饰性蛋白质,如糖蛋白或脂蛋白,或结合,如洗涤剂溶解膜蛋白。因此,SEC-MALS 是蛋白质化学家的关键工具,他必须确认用于生物或生物技术研究的分子的生物物理特性和溶液行为。SEC-MALS 该协议分析纯蛋白单体和聚合体的分子量和大小。获得的数据为进一步的SEC-MALS分析奠定了基础,包括复合物、糖蛋白和表面活性剂结合膜蛋白的分析。