Karakterisering af proteiner efter størrelse-eksklusions kromatografi koblet til multi-vinkel Light spredning (SEC-MALS)

Analytisk størrelse-udelukkelses kromatografi (SEC), der almindeligvis anvendes til bestemmelse af molekylvægten af proteiner og protein-protein komplekser i opløsning, er en relativ teknik, der er afhængig af analyteens elueringsvolumen for at estimere Molekylær Vægt. Når proteinet ikke er kugleformet eller undergår ikke-ideelle kolonne interaktioner, er kalibreringskurven baseret på protein standarder ugyldig, og molekylvægten bestemt fra elueringvolumen er ukorrekt. Multi-vinkel lys spredning (MALS) er en absolut teknik, der bestemmer molekylvægten af en analysand i opløsning fra grundlæggende fysiske ligninger. Kombinationen af SEC for separation med MALS til analyse udgør et alsidigt, pålideligt middel til karakterisering af opløsninger af en eller flere protein arter, herunder monomerer, indfødte oligomerer eller aggregater, og heterokomplekser. Da målingen foretages ved hvert elutions volumen, kan SEC-MALS bestemme, om en eluering peak er homogen eller heterogen og skelne mellem en fast molekylvægt fordeling kontra dynamisk ligevægt. Det er også muligt at analysere modificerede proteiner såsom glycoproteiner eller lipoproteiner eller konjugater såsom opløsningsmidler, der er opløselig for opvaskemiddel. Derfor er SEC-MALS et vigtigt værktøj for protein kemikeren, der skal bekræfte de biofysiske egenskaber og opløsningens opførsel af molekyler, der produceres til biologisk eller bioteknologisk forskning. Denne protokol for SEC-MALS analyserer molekylvægten og størrelsen af rene protein monomerer og aggregater. De indsamlede data tjener som grundlag for yderligere SEC-MALS analyser, herunder for komplekser, glycoproteiner og overfladeaktive membran proteiner.