Caractérisation des protéines par chromatographie d'exclusion couplée à multi-angle Light Scattering (SEC-MALS)

La chromatographie analytique d'exclusion de taille (SEC), couramment utilisée pour déterminer le poids moléculaire des protéines et des complexes protéines-protéines en solution, est une technique relative qui repose sur le volume d'élution de l'analyte pour estimer les poids. Lorsque la protéine n'est pas globulaire ou subit des interactions de colonne non idéales, la courbe d'étalonnage basée sur les normes de protéines est invalide, et le poids moléculaire déterminé à partir du volume d'élution est incorrect. La diffusion de la lumière multi-angle (MALS) est une technique absolue qui détermine le poids moléculaire d'un analyte dans la solution à partir d'équations physiques de base. La combinaison de SEC pour la séparation avec MALS pour l'analyse constitue un moyen polyvalent et fiable pour caractériser les solutions d'une ou plusieurs espèces protéiques, y compris les monomères, oligomères indigènes ou agrégats, et les hétérocomplexes. Étant donné que la mesure est effectuée à chaque volume d'élution, SEC-MALS peut déterminer si un pic d'élution est homogène ou hétérogène et faire la distinction entre une répartition du poids moléculaire fixe par rapport à l'équilibre dynamique. L'analyse de protéines modifiées telles que les glycoprotéines ou les lipoprotéines, ou des conjugués tels que les protéines membranaires détergent-solubilisées, est également possible. Par conséquent, SEC-MALS est un outil essentiel pour le chimiste de protéine qui doit confirmer les propriétés biophysiques et le comportement de solution des molécules produites pour la recherche biologique ou biotechnologique. Ce protocole pour SEC-MALS analyse le poids moléculaire et la taille des monomères et des agrégats de protéines pures. Les données acquises servent de base à d'autres analyses SEC-MALS, y compris celles de complexes, de glycoprotéines et de protéines membranaires liées aux surfactants.