Abstract
Biochemistry
הוצאה אנליטית של כרומטוגרפיה (SEC), המשמשת בדרך כלל לקביעת המשקל המולקולרי של חלבונים ומכלולי חלבון חלבון בתמיסה, היא טכניקה יחסית המסתמכת על הנפח הגדול של האנליטה להערכת מולקולרית שקל. כאשר החלבון אינו כדורי או עובר אינטראקציות עמודה שאינן אידיאליות, עקומת הכיול המבוססת על תקני חלבונים אינה חוקית, והמשקל המולקולרי שנקבע מעוצמת הקול אינו נכון. רב זווית פיזור אור (דוליטל) היא טכניקה מוחלטת הקובעת את המשקל המולקולרי של אנליטה בפתרון משוואות פיזיות בסיסיות. השילוב של שניה להפרדה עם דוליטל לניתוח מהווה אמצעים מגוונים ומהימנים לאפיון פתרונות של מיני חלבון אחד או יותר, כולל מונמרים, מקומיים או אגרגטים, והטרוקומנים. מאז המדידה מבוצעת על כל נפח הימנעות, SEC-דוליטל יכול לקבוע אם שיא משחררי הוא הומוגנית או הטרוגנית ומבחינים בין התפלגות קבועה במשקל מולקולרי לעומת שיווי משקל דינאמי. ניתוח של חלבונים שהשתנו כגון גליקורופנס או ליפופרוטאינים, או שערי מעלה כגון חלבונים ממברנות הממברנה, מסיסות, הוא גם אפשרי. מכאן, SEC-דוליטל הוא כלי קריטי עבור כימאי החלבון אשר חייב לאשר את המאפיינים ביופיזיים והתנהגות פתרון של מולקולות המיוצרים למחקר ביולוגי או ביולוגי. פרוטוקול זה עבור SEC-דוליטל מנתח את המשקל המולקולרי ואת הגודל של חלבון טהור ונומרים ואגרגטים. הנתונים שנרכשו לשמש בסיס לניתוח נוסף שניה-דוליטל כולל אלה של מכלולי, גליקורופנס וחלבונים ממברנה מאוגד הממברנה.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved