JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

Abstract

Biochemistry

אפיון של חלבונים לפי גודל כרומטוגרפיה הדרה מצמידים לפיזור אור רב זווית (SEC-דוליטל)

Published: June 20th, 2019

DOI:

10.3791/59615

1Wyatt Technology Corporation, 2Wolfson Centre for Applied Structural Biology, The Alexander Silberman Institute of Life Science, The Hebrew University of Jerusalem, 3Danyel Biotech Ltd.

הוצאה אנליטית של כרומטוגרפיה (SEC), המשמשת בדרך כלל לקביעת המשקל המולקולרי של חלבונים ומכלולי חלבון חלבון בתמיסה, היא טכניקה יחסית המסתמכת על הנפח הגדול של האנליטה להערכת מולקולרית שקל. כאשר החלבון אינו כדורי או עובר אינטראקציות עמודה שאינן אידיאליות, עקומת הכיול המבוססת על תקני חלבונים אינה חוקית, והמשקל המולקולרי שנקבע מעוצמת הקול אינו נכון. רב זווית פיזור אור (דוליטל) היא טכניקה מוחלטת הקובעת את המשקל המולקולרי של אנליטה בפתרון משוואות פיזיות בסיסיות. השילוב של שניה להפרדה עם דוליטל לניתוח מהווה אמצעים מגוונים ומהימנים לאפיון פתרונות של מיני חלבון אחד או יותר, כולל מונמרים, מקומיים או אגרגטים, והטרוקומנים. מאז המדידה מבוצעת על כל נפח הימנעות, SEC-דוליטל יכול לקבוע אם שיא משחררי הוא הומוגנית או הטרוגנית ומבחינים בין התפלגות קבועה במשקל מולקולרי לעומת שיווי משקל דינאמי. ניתוח של חלבונים שהשתנו כגון גליקורופנס או ליפופרוטאינים, או שערי מעלה כגון חלבונים ממברנות הממברנה, מסיסות, הוא גם אפשרי. מכאן, SEC-דוליטל הוא כלי קריטי עבור כימאי החלבון אשר חייב לאשר את המאפיינים ביופיזיים והתנהגות פתרון של מולקולות המיוצרים למחקר ביולוגי או ביולוגי. פרוטוקול זה עבור SEC-דוליטל מנתח את המשקל המולקולרי ואת הגודל של חלבון טהור ונומרים ואגרגטים. הנתונים שנרכשו לשמש בסיס לניתוח נוסף שניה-דוליטל כולל אלה של מכלולי, גליקורופנס וחלבונים ממברנה מאוגד הממברנה.

Tags

148

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved