Abstract
Biochemistry
विश्लेषणात्मक आकार-निष्कर्ष क्रोमैटोग्राफी (एसईसी), आमतौर पर समाधान में प्रोटीन और प्रोटीन-प्रोटीन परिसरों के आणविक वजन के निर्धारण के लिए उपयोग किया जाता है, एक सापेक्ष तकनीक है जो आणविक अनुमान लगाने के लिए एनेलाइट की एल्यूशन मात्रा पर निर्भर करती है वजन. जब प्रोटीन गोलाकार नहीं है या गैर-आदर्श स्तंभ बातचीत से गुजरता है, प्रोटीन मानकों के आधार पर अंशांकन वक्र अमान्य है, और elution मात्रा से निर्धारित आणविक वजन गलत है. बहु-कोण प्रकाश प्रकीर्णन (MALS) एक निरपेक्ष तकनीक है जो मूल भौतिक समीकरणों से विलयन में एनालाइट के आण्विक भार को निर्धारित करती है। विश्लेषण के लिए MALS के साथ जुदाई के लिए एसईसी का संयोजन मोनोमर, देशी ओलिगोमर्स या समुच्चय, और विषमपरिसरों सहित एक या अधिक प्रोटीन प्रजातियों के समाधान की विशेषता के लिए एक बहुमुखी, विश्वसनीय साधन का गठन करता है। चूंकि माप प्रत्येक elution मात्रा में किया जाता है, एसईसी-MALS निर्धारित कर सकते हैं अगर एक eluting चोटी सजातीय या विषम है और गतिशील संतुलन बनाम एक निश्चित आणविक वजन वितरण के बीच अंतर. ग्लाइकोप्रोटीन या लिपोप्रोटीन जैसे संशोधित प्रोटीन का विश्लेषण, या डिटर्जेंट-सोलुबिलाइज्ड झिल्ली प्रोटीन जैसे संयुग्मी का विश्लेषण भी संभव है। इसलिए, एसईसी-MALS प्रोटीन केमिस्ट के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है जो जैविक या जैव-प्रौद्योगिकी अनुसंधान के लिए उत्पादित अणुओं के जैवभौतिक गुणों और समाधान व्यवहार की पुष्टि करनी चाहिए। एसईसी-MALS के लिए यह प्रोटोकॉल आणविक वजन और शुद्ध प्रोटीन monomers और समुच्चय के आकार का विश्लेषण करती है। प्राप्त डेटा आगे एसईसी-MALS विश्लेषण के लिए एक नींव के रूप में सेवा करता है जिसमें परिसर, ग्लाइकोप्रोटीन और सर्फैक्टेंट-बाउंड झिल्ली प्रोटीन शामिल हैं।
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