多角光散乱に結合したサイズ排除クロマトグラフィーによるタンパク質の特性化(SEC-MALS)

分析サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)は、溶液中のタンパク質およびタンパク質タンパク質複合体の分子量の決定に一般的に使用される、分子を推定するために分析体の溶出量に依存する相対的な技術である。重量。タンパク質が球状でない場合、または非理想的なカラム相互作用を受けると、タンパク質基準に基づく較正曲線は無効であり、溶出量から決定される分子量は正しくありません。多角光散乱(MALS)は、基本的な物理方程式から溶液中の分析物の分子量を決定する絶対技術です。分析のためのMALSとの分離のためのSECの組み合わせは、モノマー、ネイティブオリゴマーまたは凝集体、およびヘテロ複合体を含む1つ以上のタンパク質種の溶液を特徴付ける汎用性の高い、信頼性の高い手段を構成する。測定は各溶出量で行われるため、SEC-MALSは溶出ピークが均質か不均一であるかを判断し、固定分子量分布と動的平衡を区別することができます。糖タンパク質やリポタンパク質などの修飾タンパク質、または洗剤溶解膜タンパク質などのコンジュゲートの解析も可能です。したがって、SEC-MALSは、生物工学的またはバイオテクノロジー研究のために産生される分子の生物物理学的特性と溶液挙動を確認しなければならないタンパク質化学者にとって重要なツールです。SEC-MALSのこのプロトコルは、純粋なタンパク質モノマーおよび凝集体の分子量と大きさを分析します。取得したデータは、複合体、糖タンパク質、界面活性剤結合膜タンパク質を含むSEC-MALSのさらなる分析の基盤として機能します。