Karakterisering av proteiner etter størrelses-ekskludering kromatografi koblet til multi-vinkel lysspredning (SEC-MALS)

Analytisk størrelse-utelukkelse kromatografi (SEC), vanligvis brukes for fastsettelse av Molekylvekten av proteiner og protein-protein komplekser i løsningen, er en relativ teknikk som er avhengig av eluering volumet av analytt å anslå molekylær Vekt. Når proteinet ikke er globular eller gjennomgår ikke-ideelle kolonnen interaksjoner, kalibreringen kurve basert på protein standarder er ugyldig, og Molekylvekten bestemmes fra eluering volumet er feil. Multi-vinkel lysspredning (MALS) er en absolutt teknikk som bestemmer Molekylvekten av en analytt i løsning fra grunnleggende fysiske ligninger. Kombinasjonen av SEC for separasjon med MALS for analyse utgjør en allsidig, pålitelig måte for karakteriserer løsninger av en eller flere protein arter, inkludert monomerer, innfødte oligomers eller aggregater, og heterocomplexes. Siden målingen utføres ved hvert eluering volum, kan SEC-MALS avgjøre om en tent topp er homogen eller heterogen og skille mellom en fast molekylvekt fordeling kontra dynamisk likevekt. Analyse av modifiserte proteiner som glykoproteiner eller lipoproteiner, eller konjugater som vaskemiddel-solubilized membran proteiner, er også mulig. Herav, SEC-MALS er en betenkelig verktøyet for det protein kjemiker hvem må anerkjenne Biofysiske eiendom og løsning opptreden av molekyler produsert for Biological eller bioteknologisk forskning. Denne protokollen for SEC-MALS analyserer Molekylvekten og størrelsen av ren protein monomerer og aggregater. Dataene ervervet tjene som et grunnlag for videre SEC-MALS analyser inkludert de av komplekser, glykoproteiner og overflateaktivt middel-bundet membran proteiner.