Характеристика белков по размеру-исключение хроматографии в сочетании с многоугловой рассеяния света (SEC-MALS)

Аналитическая хроматография размер-исключения (SEC), обыкновенно используемая для определения молекулярного веса протеинов и белков-белковых комплексов в растворе, относительная техника которая полагается на томе elution analyte для того чтобы оценить молекулярное Вес. Когда белок не является шарокулным или подвергается неидеальным взаимодействиям столбцов, кривая калибровки, основанная на белковых стандартах, недействительна, а молекулярный вес, определяемый из объема elution, неверен. Многоугольное рассеяние света (MALS) является абсолютной техникой, которая определяет молекулярный вес анализа в растворе из основных физических уравнений. Сочетание SEC для разделения с MALS для анализа представляет собой универсальное, надежное средство для характеристики решений одного или нескольких видов белков, включая мономера, местные олигомеры или агрегаты, и гетерокомплексы. Поскольку измерение выполняется на каждом томе elution, SEC-MALS может определить, является ли пик улюлинга однородным или неоднородным, и различать фиксированное молекулярное распределение веса и динамическое равновесие. Анализ модифицированных белков, таких как гликопротеины или липопротеины, или конъюги, такие как моющие средства- имущие мембранные белки, также возможно. Таким образом, SEC-MALS является критическим инструментом для белка химик, который должен подтвердить биофизические свойства и решение поведения молекул, производимых для биологических или биотехнологических исследований. Этот протокол для SEC-MALS анализирует молекулярный вес и размер чистых белковых мономеров и агрегатов. Полученные данные служат основой для дальнейшего анализа SEC-MALS, включая анализы комплексов, гликопротеинов и мембранных белков, связанных с сурфактантами.