Caracterización de proteínas por cromatografía de exclusión de tamaño acoplada a dispersión de luz multiángulo (SEC-MALS)

La cromatografía analítica de exclusión de tamaño (SEC), comúnmente utilizada para la determinación del peso molecular de proteínas y complejos proteínas-proteínas en solución, es una técnica relativa que se basa en el volumen de elución del analito para estimar el Peso. Cuando la proteína no es globular o sufre interacciones de columna no ideales, la curva de calibración basada en estándares de proteína no es válida, y el peso molecular determinado a partir del volumen de elución es incorrecto. La dispersión de luz multiángulo (MALS) es una técnica absoluta que determina el peso molecular de un analito en solución a partir de ecuaciones físicas básicas. La combinación de SEC para la separación con MALS para el análisis constituye un medio versátil y confiable para caracterizar las soluciones de una o más especies de proteínas, incluidos monómeros, oligómeros o agregados nativos, y heterocomplejos. Dado que la medición se realiza en cada volumen de elución, SEC-MALS puede determinar si un pico de elución es homogéneo o heterogéneo y distinguir entre una distribución de peso molecular fija frente al equilibrio dinámico. También es posible el análisis de proteínas modificadas como glicoproteínas o lipoproteínas, o conjugados como las proteínas de membrana sofilizadas con detergente. Por lo tanto, SEC-MALS es una herramienta crítica para el químico proteico que debe confirmar las propiedades biofísicas y el comportamiento de la solución de las moléculas producidas para la investigación biológica o biotecnológica. Este protocolo para SEC-MALS analiza el peso molecular y el tamaño de los monómeros y agregados de proteínas puras. Los datos adquiridos sirven como base para nuevos análisis SEC-MALS, incluidos los de complejos, glicoproteínas y proteínas de membrana unidas a surfactantes.