Boyutlar-dışlama kromatografi ile çok açılı ışık saçılmasına bağlı proteinlerin karakterizasyonu (SEC-,)

Çözümde proteinler ve protein-protein kompleksler moleküler ağırlığı belirlenmesi için yaygın olarak kullanılan analitik boyut-dışlama Kromatografi (SEC), moleküler tahmin etmek için analitin elüsyon hacmine dayanan bir göreli tekniktir Ağırlık. Protein globüler değil veya ideal olmayan sütun etkileşimleri giderse, protein standartlarına dayalı kalibrasyon eğrisi geçersiz ve elüsyon hacmine göre belirlenen moleküler ağırlık yanlıştır. Çok açılı ışık saçılma (Iler) temel fiziksel denklemlerden çözüm bir analitin moleküler ağırlığını belirleyen mutlak bir tekniktir. Bir ya da daha fazla protein türünün monomerler, yerli oligomerler veya agrega ve heterokompleksleri gibi çözümlerini karakterize etmek için, bir veya daha fazla proteinin analizini yapmak için çok yönlü, güvenilir bir araç teşkil eder. Ölçüm her bir elüsyon hacminde gerçekleştirildiği için, SEC-bir tepe homojen veya heterojen olup olmadığını belirleyebilir ve sabit moleküler ağırlık dağılımı ile dinamik denge arasında ayrım yapabilir. Glikoproteinler veya lipoproteinler gibi değiştirilmiş proteinlerin analizi veya deterjan-çözünen membran proteinleri gibi Konjugat da mümkündür. Bu nedenle, SEC-AKILER biyolojik veya biyoteknolojik araştırmalar için üretilen moleküllerin Biyofizik özelliklerini ve çözüm davranışlarını onaylamalıdır protein kimyager için kritik bir araçtır. Bu protokol, sn-erleri için moleküler ağırlığı ve saf protein monomerlerin ve agregaların boyutunu analiz eder. Elde edilen veriler, kompleksleri, glikoproteinler ve yüzeyfakan bağlı membran proteinlerinin de dahil olduğu daha fazla SEC-akleri analizleri için temel olarak hizmet vermektedir.