Transillumination-assisteret dissektion af specifikke stadier af musen Seminiferous Epitel Cycle for Downstream Immunostaining Analyser

Spermatogenese er en unik differentieringsproces, der i sidste ende giver anledning til en af de mest forskellige celletyper i kroppen, sæden. Differentiering af kimceller finder sted i de cytoplasmiske lommer af somatiske Sertoli-celler, der er vært for 4 til 5 generationer af kimceller samtidigt og koordinerer og synkroniserer deres udvikling. Derfor er sammensætningen af kimcelletyper i et tværsnit konstant, og disse celleforeninger er også kendt som stadier (I-XII) af den seminiferøse epitelcyklus. Det er vigtigt, at stadier også kan identificeres fra intakte seminiferous tubules baseret på deres differentiale lysabsorption / scatter-egenskaber afsløret ved transillumination, og det faktum, at stadierne følger hinanden langs tubule i numerisk rækkefølge. I denne artikel beskrives en transilluminationsassisteret mikrodissectionmetode til isolering af seminiferøse tubulesegmenter, der repræsenterer specifikke stadier af musens seminiferøse epitelcyklus. Lysabsorptionsmønsteret for seminiferøse rør inspiceres først under et dissektionsmikroskop, og derefter skæres tubulesegmenter, der repræsenterer specifikke stadier, og anvendes til downstream-applikationer. Her beskriver vi immunostaining protokoller for fase-specifikke squash præparater og for intakt tubule segmenter. Denne metode gør det muligt for en forsker at fokusere på biologiske begivenheder, der finder sted i bestemte faser af spermatogenese, hvilket giver et unikt værktøj til udviklingsmæssige, toksikologiske og cytologiske undersøgelser af spermatogenese og underliggende molekylære mekanismer.