Transillumination-Assisted Dissectie van specifieke stadia van de muis seminifereuze epitheelcyclus voor downstream immunostaininganalyses

Spermatogenese is een uniek differentiatieproces dat uiteindelijk aanleiding geeft tot een van de meest verschillende celtypen van het lichaam, het sperma. Differentiatie van kiemcellen vindt plaats in de cytoplasmatische zakken van somatische Sertoli-cellen die 4 tot 5 generaties kiemcellen tegelijkertijd hosten en hun ontwikkeling coördineren en synchroniseren. Daarom is de samenstelling van kiemceltypen binnen een doorsnede constant, en deze celassociaties staan ook bekend als stadia (I-XII) van de seminifereuze epitheelcyclus. Belangrijk is dat stadia ook kunnen worden geïdentificeerd aan de hand van intacte seminifereuze tubuli op basis van hun differentiële lichtabsorptie/ verstrooiingskenmerken die door transilluminatie worden onthuld, en het feit dat de stadia elkaar in een numerieke volgorde langs de tubulus volgen. Dit artikel beschrijft een transillumination-ondersteunde microdissectiemethode voor de isolatie van seminifereuze tubulussegmenten die specifieke stadia van de seminifereuze epitheelcyclus van muizen vertegenwoordigen. Het lichtabsorptiepatroon van seminifereuze tubuli wordt eerst geïnspecteerd onder een dissectiemicroscoop en vervolgens worden tubulisegmenten die specifieke stadia vertegenwoordigen gesneden en gebruikt voor downstreamtoepassingen. Hier beschrijven we immunostainingprotocollen voor podiumspecifieke squashpreparaten en voor intacte tubulussegmenten. Deze methode stelt een onderzoeker in staat om zich te concentreren op biologische gebeurtenissen die plaatsvinden in specifieke fasen van spermatogenese, waardoor een uniek hulpmiddel wordt geboden voor ontwikkelings-, toxicologische en cytologische studies van spermatogenese en onderliggende moleculaire mechanismen.