Transillumination-assistert spredning av spesifikke stadier av musen seminiferøs epitelsyklus for nedstrøms immunstaining analyser

Spermatogenese er en unik differensieringsprosess som til slutt gir opphav til en av de mest distinkte celletypene i kroppen, sæden. Differensiering av bakterieceller foregår i de cytoplasmatiske lommene til somatiske Sertoli-celler som er vert for 4 til 5 generasjoner av bakterieceller samtidig og koordinerer og synkroniserer utviklingen. Derfor er sammensetningen av bakteriecelletyper i et tverrsnitt konstant, og disse celleforeningene er også kjent som stadier (I–XII) av den seminiferøse epitelsyklusen. Viktigere, stadier kan også identifiseres fra intakt seminiferøse tubuli basert på deres differensial lysabsorpsjon / scatter egenskaper avslørt ved transillumination, og det faktum at stadiene følger hverandre langs tubule i numerisk rekkefølge. Denne artikkelen beskriver en transillumination-assistert mikrodisseksjon metode for isolering av seminiferøse tubule segmenter som representerer bestemte stadier av mus seminiferous epitel syklus. Lysabsorpsjonsmønsteret til seminiferøse tubuli inspiseres først under et disseksjonsmikroskop, og deretter tubule segmenter som representerer bestemte stadier kuttes og brukes til nedstrøms applikasjoner. Her beskriver vi immunstaining protokoller for scenespesifikke squashpreparater og for intakte tubule segmenter. Denne metoden gjør det mulig for en forsker å fokusere på biologiske hendelser som finner sted i bestemte faser av spermatogenese, og dermed gi et unikt verktøy for utviklings-, toksikologiske og cytologiske studier av spermatogenese og underliggende molekylære mekanismer.