Transillumination-assisterad dissekering av specifika stadier av mus seminiferous epitelial cykel för nedströms immunostaining analyser

Spermatogenesis är en unik differentieringsprocess som i slutändan ger upphov till en av de mest distinkta celltyperna i kroppen, spermierna. Differentiering av könsceller sker i de cytoplasmiska fickorna i somatiska Sertoli-celler som är värd för 4 till 5 generationer av könsceller samtidigt och samordnar och synkroniserar deras utveckling. Därför är sammansättningen av könscellstyper inom ett tvärsnitt konstant, och dessa cellassociationer är också kända som stadier (I-XII) i den seminifera epitelcykeln. Viktigt är att steg också kan identifieras från intakta seminiferous tubules baserat på deras differentiella ljus absorption/scatter egenskaper som avslöjas av transillumination, och det faktum att stadierna följer varandra längs tubule i en numerisk ordning. Denna artikel beskriver en transillumination-assisted microdissection metod för isolering av seminiferous tubule segment som representerar specifika stadier av mus seminiferous epitelial cykel. Ljusabsorptionsmönstret för seminiferous tubules inspekteras först under ett dissekeringsmikroskop, och sedan skärs tubulesegment som representerar specifika steg och används för nedströmsapplikationer. Här beskriver vi immunostaining protokoll för stegspecifika squash preparat och för intakta tubule segment. Denna metod gör det möjligt för en forskare att fokusera på biologiska händelser som äger rum i specifika faser av spermatogenes, vilket ger ett unikt verktyg för utvecklingsmässiga, toxikologiska och cytologiska studier av spermatogenes och underliggande molekylära mekanismer.