Aşağı Akış İmmünasyon Analizleri için Fare Seminifer Epitel Döngüsünün Belirli Aşamalarının Transilluminasyon Destekli Diseksiyonu

Spermatogenez, sonuçta vücudun en farklı hücre türlerinden biri olan sperme yol açan benzersiz bir farklılaşma sürecidir. Mikrop hücrelerinin farklılaşması, 4 ila 5 nesil mikrop hücresine aynı anda ev sahipliği yapan ve gelişimlerini koordine eden ve senkronize eden somatik Sertoli hücrelerinin sitoplazmik ceplerinde gerçekleşir. Bu nedenle, bir kesit içindeki mikrop hücre tiplerinin bileşimi sabittir ve bu hücre ilişkileri seminifer epitel döngüsünün aşamaları (I–XII) olarak da bilinir. Daha da önemlisi, aşamalar, transilüminasyon ile ortaya çıkan diferansiyel ışık emilimi / saçılma özelliklerine ve aşamaların tübül boyunca birbirini sayısal bir sırada takip etmesine bağlı olarak bozulmamış seminifer tübüllerden de tanımlanabilir. Bu makalede, fare seminifer epitel döngüsünün belirli aşamalarını temsil eden seminifer tübül segmentlerinin izolasyonu için transilluminasyon destekli bir mikrodispeksiyon yöntemi açıklanmaktadır. Seminifer tübüllerin ışık emme deseni önce diseksiyon mikroskobu altında incelenir ve daha sonra belirli aşamaları temsil eden tübüle segmentleri kesilir ve aşağı akış uygulamaları için kullanılır. Burada, aşamaya özgü kabak preparatları ve sağlam tübül segmentleri için immünostaining protokollerini açıklıyoruz. Bu yöntem, bir araştırmacının spermatogenezin belirli aşamalarında gerçekleşen biyolojik olaylara odaklanmasını sağlar, böylece spermatogenez ve alttaki moleküler mekanizmaların gelişimsel, toksikolojik ve sitolojik çalışmaları için benzersiz bir araç sağlar.