एक शुद्ध DEC-205-विट्रो में माउस Dendritic कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए पूर्ण लंबाई प्रोटीन के साथ एंटीबॉडी निर्देशित और वीवो में रासायनिक Conjugation

वीवो में डेंड्रिटिक कोशिकाओं (डीसी) को क्रॉस-पेश करने के लिए लक्षित एंटीजन डिलीवरी कुशलतापूर्वक टी प्रभावकार सेल प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करती है और वैक्सीन डिजाइन में एक मूल्यवान दृष्टिकोण प्रदर्शित करती है। एंटीजन को एंडोसाइटोसिस रिसेप्टर्स जैसे डीईसी-205 के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के माध्यम से डीसी को दिया जाता है जो तेज, प्रसंस्करण और MHC वर्ग I-और II-प्रस्तुति को प्रेरित करते हैं।

एक उपयुक्त एंटीबॉडी के लिए वांछित एंटीजन का कुशल और विश्वसनीय संाधीनता डीसी लक्ष्यीकरण में एक महत्वपूर्ण कदम है और अन्य कारकों के बीच एंटीजन के प्रारूप पर निर्भर करता है। एंटीबॉडी को शुद्ध करने के लिए पूर्ण लंबाई वाले प्रोटीन का रासायनिक संविलियन एक संभावित रणनीति है। अतीत में, हमने चूहों में अध्ययन को लक्षित करने वाले वीवो डीसी में मॉडल एंटीजन ओवलब्यूमिन (ओडब्ल्यूए) और एक डीईसी-205-विशिष्ट IgG2a एंटीबॉडी (αDEC-205) को सफलतापूर्वक क्रॉस-लिंकिंग की स्थापना की है। प्रोटोकॉल का पहला कदम एनएलडीसी (नॉन-लिम्फोइड डेंड्रिटिक कोशिकाओं) के सुपरनिटेंट से एंटीबॉडी का शुद्धिकरण है- 145 हाइब्रिडोमा एफ़िनिटी क्रोमेटोग्राफी द्वारा। शुद्ध एंटीबॉडी को सल्फो-एसएमसीसी (सल्फोस्यूसिनिमिडिल 4-[एन-मालेमिडोमेथिल] साइक्लोहेक्सेन-1-कार्बोक्सिलेट) द्वारा रासायनिक संयुग्मण के लिए सक्रिय किया जाता है, जबकि उसी समय ओवीए प्रोटीन के सल्फ्रीडिल-समूह टीसीईपी-एचसीएल (ट्राइस (2-कार्बोक्सिएथिल) फॉस्फिन हाइड्रोक्लोराइड) के साथ इनक्यूबेशन के माध्यम से उजागर होते हैं। अतिरिक्त टीएमईपी-एचसीएल और सल्फो-एसएमसीसी को हटा दिया जाता है और एंटीजन को रातोंरात युग्मन के लिए सक्रिय एंटीबॉडी के साथ मिलाया जाता है। जिसके परिणामस्वरूप αDEC-205/OVA conjugate केंद्रित है और अनबाउंड OVA से मुक्त है । αDEC-205 के लिए OVA के सफल conjugation पश्चिमी दाग विश्लेषण और एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोर्बेंट परख (एलिसा) द्वारा सत्यापित किया जाता है।

हमने सफलतापूर्वक उपयोग किया है, लिवर में साइटोटॉक्सिक टी सेल प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने के लिए रासायनिक क्रॉसलिंक-αDEC-205/OVA का उपयोग किया है और डीईसी-205⁺ डीसी के वीवो लक्ष्यीकरण में निम्नलिखित ह्यूमरल और सेलुलर प्रतिरक्षा को प्रेरित करने में उनकी क्षमता के लिए विभिन्न एडजुवेंट्स की तुलना करने के लिए। इसके अलावा, इस तरह के रासायनिक युग्मित एंटीबॉडी/एंटीजन conjugates ट्यूमर एंटीजन के लिए वैक्सीन प्रतिक्रियाओं के कुशल प्रेरण के लिए मूल्यवान उपकरण प्रदान करते है और रोकथाम और ट्यूमर के विभिंन प्रकार की चिकित्सा के बारे में शास्त्रीय प्रतिरक्षण दृष्टिकोण से बेहतर साबित हो गया है ।