Conjugação Química de um anticorpo purificado DEC-205-Directed com proteína de comprimento completo para direcionar células dendríticas de camundongos in vitro e in vivo

A entrega de antígenos direcionados para células dendríticas de apresentação cruzada (DC) in vivo in vivo induz eficientemente as respostas celulares de efeito T e exibe uma abordagem valiosa no design da vacina. O antígeno é fornecido em DC através de anticorpos específicos para receptores de endocitose, como o DEC-205, que induz a captação, processamento e apresentação da classe I e II do MHC.

A conjugação eficiente e confiável do antígeno desejado para um anticorpo adequado é um passo crítico na segmentação dc e, entre outros fatores, depende do formato do antígeno. A conjugação química de proteína de comprimento total para anticorpos purificados é uma estratégia possível. No passado, estabelecemos com sucesso a inter-vinculação do modelo antigen ovalbumin (OVA) e um anticorpo IgG2a específico DEC-205 (αDEC-205) para estudos in vivo DC direcionados em camundongos. O primeiro passo do protocolo é a purificação do anticorpo do supernacante do NLDC (células dendríticas não linfoides)-145 hibrim por cromatografia de afinidade. O anticorpo purificado é ativado para conjugação química por sulfo-SMCC (sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl] ciclohexano-1-carboxilato) enquanto ao mesmo tempo os grupos de sulfhydryl da proteína OVA são expostos através de incubação com TCEP-HCl (tris (tris (2 carboxyethyl). O excesso de TCEP-HCl e sulfo-SMCC são removidos e o antígeno é misturado com o anticorpo ativado para acoplamento durante a noite. O conjugado αDEC-205/OVA resultante é concentrado e liberado de OVA não vinculado. A conjugação bem sucedida de OVA para αDEC-205 é verificada pela análise de manchas ocidentais e ensaio imunosorbente ligado à enzima (ELISA).

Usamos com sucesso αDEC-205/OVA quimicamente cruzado para induzir respostas de células T citotóxicas no fígado e comparar diferentes adjuvantes para seu potencial em induzir imunidade humoral e celular após o direcionamento vivo do DEC-205⁺ DC. Além disso, esses conjugados quimicamente acoplados a anticorpos/antígenos oferecem ferramentas valiosas para a indução eficiente das respostas vacinais aos antígenos tumorais e têm sido comprovadamente superiores às abordagens clássicas de imunização em relação à prevenção e terapia de vários tipos de tumores.