Génération d’équivalents de peau humaine vascularisée auto-assemblés

Les équivalents de peau humaine (HSE) sont des constructions tissulaires qui modélisent les composants épidermiques et cutanés de la peau humaine. Ces modèles ont été utilisés pour étudier le développement de la peau, la cicatrisation des plaies et les techniques de greffe. De nombreux HSE continuent de manquer de vascularisation et sont en outre analysés par sectionnement histologique post-culture qui limite l’évaluation volumétrique de la structure. Présenté ici est un protocole simple utilisant des matériaux accessibles pour générer des équivalents vascularisés de peau humaine (VHSE) ; plus loin décrits sont des techniques volumétriques d’imagerie et de quantification de ces constructions. En bref, les VHSEs sont construits dans 12 inserts de culture de puits dans lesquels des cellules cutanées et épidermiques sont ensemencées dans le gel de collagène de type I de queue de rat. Le compartiment cutané est constitué de fibroblastes et de cellules endothéliales dispersées dans tout le gel de collagène. Le compartiment épidermique est constitué de kératinocytes (cellules épithéliales de la peau) qui se différencient à l’interface air-liquide. Il est important de faire en sorte que ces méthodes soient personnalisables en fonction des besoins du chercheur, les résultats démontrant la génération de VHSE avec deux types de cellules fibroblastiques différents : les fibroblastes cutanés humains (hDF) et les fibroblastes pulmonaires humains (IMR90s). Des VHSEs ont été développés, es imaged par la microscopie confocal, et volumétriquement analysés utilisant le logiciel de calcul à des points de temps de 4 et de 8 semaines. Un processus optimisé pour fixer, colorer, imager, et effacer VHSEs pour l’examen volumétrique est décrit. Ce modèle complet, cette imagerie et ces techniques d’analyse sont facilement personnalisables en fonction des besoins de recherche spécifiques de laboratoires individuels avec ou sans expérience préalable en ESS.