Generering av självmonterade vaskulariserade mänskliga hudekvivalenter

Mänskliga hudekvivalenter (HSE) är vävnadskonstruerade konstruktioner som modellerar epidermala och dermala komponenter i mänsklig hud. Dessa modeller har använts för att studera hudutveckling, sårläkning och ympningstekniker. Många HSEs fortsätter att sakna vaskulatur och analyseras dessutom genom post-culture histologiska sektionering som begränsar volymetrisk bedömning av strukturen. Presenteras här är ett enkelt protokoll som använder tillgängliga material för att generera vascularized mänskliga hud motsvarigheter (VHSE); ytterligare beskrivs är volymetrisk avbildning och kvantifiering tekniker av dessa konstruktioner. Kort, VHSEs är konstruerade i 12 brunn kulturinsatser där dermal och epidermal celler sås i råtta svans kollagen typ I gel. Dermal kupén består av fibroblast och endotelceller spridda över hela kollagengelen. Epidermalt utrymme består av keratinocyter (hudepitela celler) som skiljer vid luft-vätskegränssnittet. Viktigt är att dessa metoder är anpassningsbara baserat på forskarens behov, med resultat som visar VHSE-generation med två olika fibroblastcelltyper: mänskliga dermala fibroblaster (hDF) och mänskliga lungfibroblaster (IMR90s). VHSEs utvecklades, avbildas genom confocal mikroskopi och volymetriskt analyseras med hjälp av beräkningsprogram vid 4- och 8-veckors tidspunkter. En optimerad process för att fixa, fläcka, bild och tydliga VHSEs för volymetrisk undersökning beskrivs. Denna omfattande modell, avbildning och analystekniker är lätt anpassningsbara till de specifika forskningsbehoven hos enskilda laboratorier med eller utan tidigare HSE-erfarenhet.