Activering en conjugatie van oplosbare polysacchariden met behulp van 1-cyano-4-dimethylaminopyridinetetrafluorboraat (CDAP)

Geconjugeerde vaccins zijn opmerkelijke vooruitgangen in de vaccinologie. Voor de bereiding van polysaccharideconjugaatvaccins kunnen de polysacchariden gemakkelijk worden gefunctionaliseerd en gekoppeld aan vaccindragereiwitten met behulp van 1-cyano-4-dimethylaminopyridinetetrafluoroboraat (CDAP), een gemakkelijk te hanteren cyanylating-reagens. CDAP activeert polysacchariden door te reageren met koolhydraathydroxylgroepen bij pH 7-9. De stabiliteit en reactiviteit van CDAP zijn sterk pH-afhankelijk. De pH van de reactie neemt ook af tijdens activering als gevolg van de hydrolyse van CDAP, waardoor een goede pH-regeling de sleutel is tot reproduceerbare activering. Het oorspronkelijke CDAP-activeringsprotocol werd uitgevoerd bij kamertemperatuur in niet-gebufferde pH 9-oplossingen.

Vanwege de snelle reactie onder deze omstandigheden (<3 min) en de bijbehorende snelle pH-daling van de snelle CDAP-hydrolyse, was het een uitdaging om de pH van de doelreactie in het korte tijdsbestek snel aan te passen en te handhaven. Het verbeterde protocol dat hier wordt beschreven, wordt uitgevoerd bij 0 °C, wat de CDAP-hydrolyse vertraagt en de activeringstijd verlengt van 3 minuten tot ~ 15 minuten. Dimethylaminopyridine (DMAP) werd ook gebruikt als buffer om de polysaccharide-oplossing vooraf aan te passen aan de pH van de doelactivering voordat het CDAP-reagens werd toegevoegd. De langere reactietijd, in combinatie met de langzamere CDAP-hydrolyse en het gebruik van DMAP-buffer, maakt het gemakkelijker om de activerings-pH gedurende de gehele duur van het activeringsproces te handhaven. Het verbeterde protocol maakt het activeringsproces minder hectisch, reproduceerbaarder en vatbaarder voor opschaling.