Activation et conjugaison de polysaccharides solubles à l’aide de tétrafluoroborate de 1-cyano-4-diméthylaminopyridine (CDAP)

Les vaccins conjugués sont des avancées remarquables en vaccinologie. Pour la préparation de vaccins conjugués polysaccharidiques, les polysaccharides peuvent être facilement fonctionnalisés et liés aux protéines porteuses du vaccin à l’aide du tétrafluoroborate de 1-cyano-4-diméthylaminopyridine (CDAP), un réactif cyanylant facile à manipuler. CdAP active les polysaccharides en réagissant avec les groupes hydroxyles glucidiques à pH 7-9. La stabilité et la réactivité du CDAP dépendent fortement du pH. Le pH de la réaction diminue également lors de l’activation en raison de l’hydrolyse du CDAP, ce qui fait du bon contrôle du pH la clé d’une activation reproductible. Le protocole d’activation CDAP original a été réalisé à température ambiante dans des solutions de pH 9 sans tampon.

En raison de la réaction rapide dans ces conditions (<3 min) et de la chute rapide du pH qui l’accompagne en raison de l’hydrolyse rapide du CDAP, il était difficile d’ajuster et de maintenir rapidement le pH de la réaction cible dans un court laps de temps. Le protocole amélioré décrit ici est effectué à 0 °C, ce qui ralentit l’hydrolyse CDAP et prolonge le temps d’activation de 3 min à ~15 min. La diméthylaminopyridine (DMAP) a également été utilisée comme tampon pour pré-ajuster la solution de polysaccharide au pH d’activation cible avant d’ajouter le réactif CDAP. Le temps de réaction plus long, associé à l’hydrolyse CDAP plus lente et à l’utilisation d’un tampon DMAP, facilite le maintien du pH d’activation pendant toute la durée du processus d’activation. Le protocole amélioré rend le processus d’activation moins frénétique, plus reproductible et plus facile à mettre à l’échelle.