1-सायनो-4-डिमेथाइलामिनोपाइरिडीन टेट्राफ्लोरोबोरेट (सीडीएपी) का उपयोग करके घुलनशील पॉलीसैकराइड्स का सक्रियण और संाधीनता

Published: June 14th, 2021

DOI:

10.3791/62597

Andrew Lees¹, James Zhou¹

¹Fina Biosolutions LLC

ERRATUM NOTICE

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वैकसिनोलॉजी में कंजूगेट टीके उल्लेखनीय प्रगति हैं। पॉलीसैकराइड संजूबा टीकों की तैयारी के लिए, पॉलीसैकराइड्स को आसानी से कार्यात्मक किया जा सकता है और 1-साइनो-4-डाइमेथाइलामिनोपाइरिडीन टेट्राफ्लोरोबोरोबोरेट (सीडीएपी), एक आसान-से-हैंडल साइनिलेटिंग रिएजेंट का उपयोग करके वैक्सीन वाहक प्रोटीन से जोड़ा जा सकता है। सीडीएपी पीएच 7-9 पर कार्बोहाइड्रेट हाइड्रोक्सिल समूहों के साथ प्रतिक्रिया करके पॉलीसैकराइड्स को सक्रिय करता है। सीडीएपी की स्थिरता और प्रतिक्रियाशीलता अत्यधिक पीएच-निर्भर है। सीडीएपी के हाइड्रोलिसिस के कारण सक्रियण के दौरान प्रतिक्रिया का पीएच भी कम हो जाता है, जो अच्छा पीएच प्रजनन सक्रियण की कुंजी को नियंत्रित करता है। मूल सीडीएपी सक्रियण प्रोटोकॉल कमरे के तापमान पर बिना खरीदार पीएच 9 समाधानों में किया गया था।

इस स्थिति (<3 मिनट) के तहत तेजी से प्रतिक्रिया और तेजी से सीडीएपी हाइड्रोलिसिस से तेजी से पीएच ड्रॉप के कारण, कम समय सीमा में लक्ष्य प्रतिक्रिया पीएच को जल्दी से समायोजित और बनाए रखना चुनौतीपूर्ण था। यहां वर्णित बेहतर प्रोटोकॉल 0 डिग्री सेल्सियस पर किया जाता है, जो सीडीएपी हाइड्रोलिसिस को धीमा कर देता है और सक्रियण समय को 3 मिनट से ~ 15 मिनट तक बढ़ाता है। CDAP रिएजेंट जोड़ने से पहले लक्ष्य सक्रियण पीएच के पॉलीसैकराइड समाधान को पूर्व-समायोजित करने के लिए डिमेथाइलामिनोपाइरिडीन (डीएमएपी) का भी उपयोग बफर के रूप में किया गया था। लंबी प्रतिक्रिया समय, धीमी सीडीएपी हाइड्रोलिसिस और डीएमएपी बफर के उपयोग के साथ मिलकर, सक्रियण प्रक्रिया की पूरी अवधि के लिए सक्रियण पीएच को बनाए रखना आसान बनाता है। बेहतर प्रोटोकॉल सक्रियण प्रक्रिया को कम उन्मत्त, अधिक प्रजनन योग्य और स्केलिंग के लिए अधिक उत्तरदायी बनाता है।

Erratum

Erratum: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP)

An erratum was issued for: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP). A figure was updated.

Figure 4 was updated from:

Figure 4: Representative results for CDAP activation of dextran. Typical standard curves for the (A) resorcinol/sulfuric acid and (B) TNBS assays. The assay results for dextran activated with 0.25 and 0.5 mg CDAP/mg dextran are shown. Glucose was used as the standard for the resorcinol assay. Dextran, in mg/mL, is divided by 100 kDa to give a molar concentration. The hydrazide concentration is determined using ADH as the standard and the results expressed as µM Hz. (C) Calculation of hydrazide: dextran ratios.The level of derivatization was calculated as hydrazides per 100 kDa of dextran to facilitate the comparison between polymers of different average molecular weights. The % weight ratio of g ADH/g dextran was calculated using a MW of 174 g/mole for ADH. Please click here to view a larger version of this figure.

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