Активация и конъюгация растворимых полисахаридов с использованием 1-циано-4-диметиламинопиридина тетрафторбората (CDAP)

Published: June 14th, 2021

DOI:

10.3791/62597

Andrew Lees¹, James Zhou¹

¹Fina Biosolutions LLC

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Конъюгированные вакцины являются замечательными достижениями в вакцинологии. Для приготовления полисахаридных конъюгированных вакцин полисахариды могут быть удобно функционализированы и связаны с белками-носителями вакцин с использованием 1-циано-4-диметиламинопиридина тетрафторбората (CDAP), простого в обращении цианилирующего реагента. CDAP активирует полисахариды, реагируя с гидроксильными группами углеводов при рН 7-9. Стабильность и реакционная способность CDAP сильно зависят от pH. pH реакции также снижается во время активации из-за гидролиза CDAP, что делает хороший контроль pH ключом к воспроизводимой активации. Оригинальный протокол активации CDAP выполняли при комнатной температуре в небуферизованных растворах рН 9.

Из-за быстрой реакции в этом состоянии (<3 мин) и сопровождающего ее быстрого падения рН от быстрого гидролиза CDAP было сложно быстро отрегулировать и поддерживать целевой рН реакции в короткие сроки. Улучшенный протокол, описанный здесь, выполняется при 0 °C, что замедляет гидролиз CDAP и увеличивает время активации с 3 мин до ~15 мин. Диметиламинопиридин (DMAP) также использовали в качестве буфера для предварительной корректировки раствора полисахарида к целевому активации рН перед добавлением реагента CDAP. Более длительное время реакции в сочетании с более медленным гидролизом CDAP и использованием буфера DMAP облегчает поддержание рН активации в течение всего процесса активации. Улучшенный протокол делает процесс активации менее неистовым, более воспроизводимым и более поддающимся масштабированию.

Erratum

Erratum: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP)

An erratum was issued for: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP). A figure was updated.

Figure 4 was updated from:

Figure 4: Representative results for CDAP activation of dextran. Typical standard curves for the (A) resorcinol/sulfuric acid and (B) TNBS assays. The assay results for dextran activated with 0.25 and 0.5 mg CDAP/mg dextran are shown. Glucose was used as the standard for the resorcinol assay. Dextran, in mg/mL, is divided by 100 kDa to give a molar concentration. The hydrazide concentration is determined using ADH as the standard and the results expressed as µM Hz. (C) Calculation of hydrazide: dextran ratios.The level of derivatization was calculated as hydrazides per 100 kDa of dextran to facilitate the comparison between polymers of different average molecular weights. The % weight ratio of g ADH/g dextran was calculated using a MW of 174 g/mole for ADH. Please click here to view a larger version of this figure.

to: